Tần suất và sự đột biến mất đoạn gien lmp1 ở bệnh nhân ung thư vòm mũi họng

Epstein-Barr (EBV) - virút có mối quan hệ mật thiết đối với ung th- vòm mũi họng (UTVMH). Chúng tôi tiến hành nghiên cứu 20 cặp mẫu (gồm máu ngoại vi và sinh thiết vòm họng) bệnh nhân UTVMH thể không biệt hoá, 5 mẫu bệnh nhân ung th- vùng đầu, cổ không ph.i UTVMH. Mục đích của nghiên cứu này nhằm điều tra tần suất của gien LMP1 là một trong những gien ở thể tiềm ẩn của virút và 30 mẫu máu ngoại vi của những ng-ời khoẻ mạnh....
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tần suất và sự đột biến mất đoạn gien lmp1 ở bệnh nhân ung thư vòm mũi họng TCNCYH 23 (3) 2003 TÇn suÊt vµ sù ®ét biÕn mÊt ®o¹n gien lmp1 ë bÖnh nh©n ung th− vßm mòi häng Ph¹m ThÞ NguyÖt H»ng, Phan ThÞ Phi Phi, NguyÔn V¨n §«, B¹ch Kh¸nh Hoµ, TrÇn ThÞ ChÝnh §¹i häc Y Hµ Néi Epstein-Barr (EBV) - virót cã mèi quan hÖ mËt thiÕt ®èi víi ung th− vßm mòi häng (UTVMH).Chóng t«i tiÕn hµnh nghiªn cøu 20 cÆp mÉu (gåm m¸u ngo¹i vi vµ sinh thiÕt vßm häng) bÖnh nh©nUTVMH thÓ kh«ng biÖt ho¸, 5 mÉu bÖnh nh©n ung th− vïng ®Çu, cæ kh«ng ph¶i UTVMH. Môc ®Ýchcña nghiªn cøu nµy nh»m ®iÒu tra tÇn suÊt cña gien LMP1 lµ mét trong nh÷ng gien ë thÓ tiÒm Èncña virót vµ 30 mÉu m¸u ngo¹i vi cña nh÷ng ng−êi khoÎ m¹nh. Sö dông hai cÆp måi LMP1 dùatheo kinh nghiÖm cña phßng thÝ nghiÖm MTC, viÖn Karolinska, Thuþ ®iÓn. Hai cÆp måi nµy ®ÆchiÖu vµ thiÕt kÕ cho gien LMP1 ®ét biÕn, cã vÞ trÝ tõ 168592 - 168174 vµ tõ vÞ trÝ 168373 - 168174(tõ genom cña EBV). KÕt qu¶ thu ®−îc nh− sau: 1. Tû lÖ gien LMP1 - EBV ë m¸u ngo¹i vi ng−êi khoÎ m¹nh lµ 96,7% (29/30 ca d−¬ng tÝnh). 2. Tû lÖ gien LMP1 - EBV ë cÆp mÉu bÖnh nh©n UTVMH thÓ biÓu m« kh«ng biÖt ho¸ lµ 100%(20/ 20 tr−êng hîp d−¬ng tÝnh) 3. Tû lÖ gien LMP1 ë bÖnh nh©n ung th− vïng ®Çu, cæ kh«ng ph¶i UTVMH lµ 100% (5/ 5 tr−ênghîp d−¬ng tÝnh). 4. Trªn ®iÖn di, 90% gien LMP1 - EBV ë m« sinh thiÕt vßm häng bÖnh nh©n UTVMH cã hiÖnt−îng ®ét biÕn mÊt ®o¹n trong khi gien LMP1 - EBV ë m¸u ngo¹i vi cña nh÷ng bÖnh nh©n nµy chØcã 10% cã ®ét biÕn mÊt ®o¹n.I. §Æt vÊn ®Ò Theo kÕt qu¶ nghiªn cøu cña nhiÒu nhµ EBV thuéc nhãm Herpes virót cã lâi ADN khoa häc trªn thÕ giíi, tr×nh tù gien LPM1 cñaxo¾n kÐp, liªn quan gÇn ®Õn mét vµi khèi u ¸c c¸c bÖnh nh©n UTVMH lµ kh¸c nhau, ®Æc biÖttÝnh ë ng−êi trong ®ã cã ung th− vßm mòi häng cã ®ét biÕn mÊt 30 bp ë ®Çu –C tËn so víi gien(UTVMH), ®Æc biÖt lµ víi thÓ ung th− biÓu m« LMP1 cña dßng tÕ bµo B95 – 8[5][6][7] ... H¬nkh«ng biÖt ho¸. Mèi liªn quan nµy ®−îc chøng n÷a, cã nh÷ng b»ng chøng cho r»ng, ®ét biÕnminh lÇn ®Çu tiªn do sù xuÊt hiÖn kh¸ng thÓ mÊt 30bp cña gien LMP1 lµ mét nh©n tè thócchèng kh¸ng nguyªn EBV trong huyÕt thanh ®Èy sù ph¸t triÓn cña khèi u (Li et al., 1996)cña bÖnh nh©n UTVMH. Mèi liªn quan nµy [7]. ViÖc mÊt 30bp cña gien LMP1 cã thÓ lµm®−îc kh¼ng ®Þnh thªm bëi viÖc ph¸t hiÖn sù cã thay ®æi cÊu tróc dÉn ®Õn thay ®æi chøc n¨ngmÆt cña EBV trong nh÷ng mÉu sinh thiÕt cña protein, ¶nh h−ëng tíi viÖc nhËn biÕtUTVMH. H¬n n÷a, gÇn ®©y b¶n sao cña EBV ë protein bëi hÖ thèng miÔn dÞch [9]. ViÖt NamthÓ tiÒm Èn gåm EBNA1 vµ LMP1, LMP2 ®· lµ mét n−íc cã tÇn suÊt UTVMH kh¸ cao trong®−îc t×m thÊy trong c¸c mÉu sinh thiÕt lóc c¸c n−íc ¢u Mü th× qu¸ thÊp tuy r»ng tû lÖUTVMH. Trong sè c¸c protein m· ho¸ cña nhiÔm EBV trªn toµn cÇu lµ cao nh− nhau (95 –virót EBV ë thÓ tiÒm Èn trªn th× LMP1 lµ mét 97%).protein quan träng: cã thÓ øc chÕ sù biÖt ho¸ vµ XuÊt ph¸t tõ t×nh h×nh thùc tiÔn nµy, chóngg©y biÕn chuyÓn tÕ bµo biÓu m« [7]. t«i tiÕn hµnh ®Ò tµi víi môc ®Ých: 91TCNCYH 23 (3) 2003 1. X¸c ®Þnh tû lÖ gien LMP1 ë ng−êi mM dNTP; 2.0mM MgCl2; 1 ®¬n vÞ Taq ADNkhoÎ m¹nh vµ bÖnh nh©n UTVMH. polymerase (Perkin – Elmer) trong PCR buffer IX. Tæng thÓ tÝch ph¶n øng lµ 50µl. 2. X¸c ®Þnh tû lÖ gien LMP1 ë bÖnh nh©nung th− vïng ®Çu, cæ kh«ng ph¶i UTVMH. - §iÒu kiÖn chu tr×nh nhiÖt: 940C/ 4 phót; 35 3. Ph¸t hiÖn ®ét biÕn gien LMP1 ë bÖnh chu kú: 950C/ 30 gi©y, 570C/ 1 phót 30 gi©y,nh©n UTVMH. 700C/ 2 phót 30 gi©y; 720C/ 10 phót → 40C.II. §èi t−îng vµ ph−¬ng ph¸p 2.3. Ph¶n øng PCR lång: 1. §èi t−îng 2.3.1. Ph¶n øng PCR lÇn thø nhÊt: ♦ §èi t−îng nghiªn cøu: - Tr×nh tù cÆp måi: - 20 cÆp mÉu: m¸u ngo¹i vi vµ sinh thiÕt 168592: 5’ - ATC GCG ACT CTG CTGvßm häng bÖnh nh©n UTVMH thÓ kh«ng biÖt GAA AT - 3’ho¸. C¸c mÉu nµy ®−îc thu thËp t¹i bÖnh viÖn 168174: 5’ - CGC GGA TCC TTA GTCK Hµ Néi tõ n¨m 2000 ®Õn 2001. ATA GTA GCT TAG - 3’ ♦ §èi t−îng chøng: - Nguyªn vËt liÖu ®Ó tiÕn hµnh ph¶n øng - 5 mÉu sinh thiÕt bÖnh nh©n ung th− ®Çu, PCR gåm: 100ng ADN; 4µM mçi måi; 0,2cæ kh¸c kh«ng ph¶i UTVMH. mM dNTP; ...