Tạo dòng lúa kháng bệnh đạo ôn và có chất lượng gạo tốt bằng phương pháp nuôi cấy bao phấn và kỹ thuật PCR

Bài viết giới thiệu một số kết quả bước đầu trong quy trình chọn dòng lúa kháng bệnh đạo ôn bằng phương pháp nuôi cấy bao phấn kết hợp sự trợ giúp của các dấu phân tử. Để nắm chi tiết nội dung nghiên cứu mời các bạn cùng tham khảo bài viết.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tạo dòng lúa kháng bệnh đạo ôn và có chất lượng gạo tốt bằng phương pháp nuôi cấy bao phấn và kỹ thuật PCR26(3): 48-55 T¹p chÝ Sinh häc 9-2004 T¹o dßng lóa kh¸ng bÖnh ®¹o «n vµ cã chÊt l−îng g¹o tèt b»ng ph−¬ng ph¸p nu«i cÊy bao phÊn vµ kü thuËt PCR Phan ThÞ B¶y, §µo ThÞ H¹nh, Qu¸ch ThÞ Liªn, Lª ThÞ Muéi, NguyÔn §øc Thµnh ViÖn C«ng nghÖ sinh häc Ngoµi c¸c chØ tiªu vÒ n¨ng suÊt vµ chÊt WAB56-125/TÎ tÐpl−îng, c¸c gièng lóa ®−îc ph¸t triÓn vµ c¶i t¹o - C¸c måi STS:cÇn ph¶i cã kh¶ n¨ng chèng chÞu víi s©u bÖnh ,chèng chÞu víi c¸c ®iÒu kiÖn bÊt lîi cña m«i RG64 lµ måi liªn kÕt víi gien kh¸ng bÖnhtr−êng vµ thÝch nghi víi nh÷ng ®iÒu kiÖn ngo¹i ®¹o «n Pi-2(t)c¶nh hÕt søc ®a d¹ng th× míi cã thÓ ph¸t triÓn®−îc ë c¸c vïng ®Þa lý kh¸c nhau ®Ó cho n¨ng RG28 lµ måi liªn kÕt víi tÝnh th¬m cña g¹osuÊt cao vµ chÊt l−îng tèt. RG171 vµ G243 lµ c¸c måi liªn kÕt víi ®é Trong bµi nµy, chóng t«i giíi thiÖu mét sè bÒn gelkÕt qu¶ b−íc ®Çu trong quy tr×nh chän dßng lóa Wxa vµ Wxb lµ c¸c måi liªn kÕt víi hµmkh¸ng bÖnh ®¹o «n b»ng ph−¬ng ph¸p nu«i cÊy l−îng amylozabao phÊn kÕt hîp sù trî gióp cña c¸c dÊu ph©n RZ323 lµ måi liªn kÕt víi ®é dµi cña h¹t.tö. 2. Ph−¬ng ph¸p I. ph−¬ng ph¸p nghiªn cøu Lai gièng b»ng ph−¬ng ph¸p lai cæ ®iÓn.1. VËt liÖu Nu«i cÊy bao phÊn: C¸c ®ßng lóa ®−îc lÊy ë giai ®o¹n cã tai l¸ ®ßng c¸ch tai l¸ thø nhÊt- Mét sè dßng/gièng lóa kh¸ng bÖnh ®¹o «n chõng 2-5 cm, tuú thuéc c¸c dßng/gièng lóa Moroberekan-nhËn tõ ViÖn nghiªn cøu lóa kh¸c nhau. §ßng ®−îc lÊy vµo buæi s¸ng tõ 9-quèc tÕ. C71 vµ TÎ tÐp nhËn tõ ViÖn B¶o vÖ thùc 10h. §ßng ®−îc xö lý l¹nh tr−íc khi ®em cÊy ëvËt. BR12 lµ dßng lóa kh¸ng bÖnh ®¹o «n míi ®iÒu kiÖn 6-8oC trong thêi gian 2-5 ngµy.chän t¹o t¹i phßng Di truyÒn tÕ bµo thùc vËt, Khö trïng ®ßng b»ng c¸ch dïng b«ng tÈmViÖn C«ng nghÖ sinh häc cån 96o lau kü toµn bé bÒ mÆt ®ßng, sau ®ã t¸ch bá c¸c líp l¸ vµ bÑ bao bäc bªn ngoµi cïng líp- Hai gièng lóa cã chÊt l−îng tèt vá máng bªn trong. Chän c¸c hoa cã h¹t phÊn ë KDML105, WAB56-125 nhËn tõ ViÖn giai ®o¹n ®¬n nh©n, c¾t lÊy c¸c bao phÊn cÊy lªnnghiªn cøu lóa quèc tÕ m«i tr−êng t¹o m« sÑo. T¹o m« sÑo tõ bao phÊn lóa trªn m«i tr−êng MT4 (N6 + 2 mg/l 2,4D +10- Khang d©n lµ gièng lóa cã n¨ng suÊt cao vµ mg/l AgNO3 +0,5 mg/l kinetin +8 g/l th¹ch + 60 chÊt l−îng kh¸ nhËn tõ ViÖn B¶o vÖ thùc vËt g/l ®−êng), trong ®iÒu kiÖn kh«ng chiÕu s¸ng vµ- C©y F1 cña c¸c cÆp lai: nhiÖt ®é phßng 26-28oC. Moroberekan/KDM L 105 T¸i sinh c©y tõ m« sÑo nu«i cÊy bao phÊn trªn m«i tr−êng MSC1 (MS + 1 mg/l BAP + 0,2 Moroberekan/WAB 56-125 mg/l NAA + 100 ml/l n−íc dõa + 30 g/l ®−êng BR12/WAB56-125 + 8 g/l th¹ch), t¹o rÔ trªn m«i tr−êng MS kh«ng C71/ KDML105 cã chÊt kÝch thÝch sinh tr−ëng, trong ®iÒu kiÖn ¸nh s¸ng ®Ìn nª-«ng vµ nhiÖt ®é phßng 28oC. Khang d©n/Moroberekan48 Trång c©y ra ruéng thÝ nghiÖm, ®¸nh gi¸ c¸c chuÈn hãa chÊt l−îng n«ng s¶n, ViÖn C«ng nghÖchØ tiªu n«ng sinh häc theo ph−¬ng ph¸p th«ng sau thu ho¹ch, th¸ng 12 n¨m 2002.dông cña Trung t©m Kh¶o nghiÖm gièng c©ytrång thuéc Bé N«ng nghiÖp vµ Ph¸t triÓn n«ng II. KÕt qu¶ vµ th¶o luËnth«n.Ph¶n øng PCR ®−îc tiÕn hµnh nh− sau 1. KÕt qu¶ t¹o m« sÑo vµ t¸i sinh c©y tõ nu«i cÊy bao phÊn Hçn hîp ph¶n øng PCR víi c¸c måi STS (25 Trong nu«i cÊy bao phÊn, cã nhiÒu yÕu tèµl) chøa trong èng Eppendorf (0,5 ml) bao gåm: ¶nh h−ëng ®Õn kh¶ n¨ng ph¸t triÓn m« sÑo vµ t¸in−íc v« trïng 17,4 µl; dung dÞch ®Öm 10 X PCR sinh c©y, nh−ng yÕu tè quan träng nhÊt lµ kiÓu2,5 µl; dNTP (5 mM) 0,6 µl; MgCl2 (50 mM) gien ®−a vµo nu«i cÊy.0,5 µl; måi (primer) 1 µl ; Taq polymeraza 0,5 C¸c bao phÊn ®| khö trïng ®−îc cÊy lªn m«iµl; ADN mÉu ...