Tối ưu hoá phương pháp Tetra-ARMS (tetra primer amplification refractory mutation) nhằm phát hiện đột biến Canton trong các trẻ sơ sinh mắc bệnh thiếu men G6PD tại thành phố Hồ Chí Minh

Thiếu men G6PD là bệnh lý khiếm khuyết enzyme ở tế bào hồng cầu hay gặp nhất ở người với nhiều biến chứng nghiêm trọng, đặc biệt ở trẻ sơ sinh. Mục tiêu của đề tài này là tối ưu hóa phương pháp Tetra-ARMS PCR trong việc phát hiện đột biến Canton gây bệnh thiếu men G6PD.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tối ưu hoá phương pháp Tetra-ARMS (tetra primer amplification refractory mutation) nhằm phát hiện đột biến Canton trong các trẻ sơ sinh mắc bệnh thiếu men G6PD tại thành phố Hồ Chí MinhY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 19 * Số 5 * 2015 Nghiên cứu Y học TỐI ƯU HOÁ PHƯƠNG PHÁP TETRA-ARMS (TETRA PRIMER AMPLIFICATION REFRACTORY MUTATION) NHẰM PHÁT HIỆNĐỘT BIẾN CANTON TRONG CÁC TRẺ SƠ SINH MẮC BỆNH THIẾU MEN G6PD TẠI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Nguyễn Vũ Hoàng Uyên*, Nguyễn Thị Huệ**, Đặng Thị Lan Anh*TÓM TẮT Bối cảnh: Thiếu men G6PD là bệnh lý khiếm khuyết enzyme ở tế bào hồng cầu hay gặp nhất ở người vớinhiều biến chứng nghiêm trọng, đặc biệt ở trẻ sơ sinh. Vì đây là bệnh di truyền, nên việc phát hiện sớm đột biếngây bệnh rất có ý nghĩa trong công tác phòng ngừa và điều trị các biến chứng. Chính vì vậy, mục tiêu của đề tàinày là tối ưu hóa phương pháp Tetra-ARMS PCR trong việc phát hiện đột biến Canton gây bệnh thiếu menG6PD. Phương pháp: Trước tiên các thành phần chính của phản ứng Tetra-ARMS PCR được tối ưu hóa. Sau đó,quy trình Tetra-ARMS chuẩn được áp dụng để phân tích kiểu gene của đột biến Canton trên ba mươi mẫu bệnhbao gồm kiểu đồng hợp và dị hợp tử (kiểu gene đã được xác định trước bằng xét nghiệm ARMS PCR thôngthường). Những mẫu cho kết quả không trùng nhau về kiểu gene giữa hai phương pháp được kiểm tra lại bằng kỹthuật giải trình tự gene. Kết quả: Trong số 13,33% mẫu bất đồng về kiểu gene giữa hai phương pháp Tetra-ARMS PCR và ARMSPCR thông thường, Tetra-ARMS cho thấy sự chính xác 100% so với kết quả giải trình tự, trong khi sự phân tíchcủa ARMS lại không trùng hợp. Kết luận: Phương pháp Tetra-ARMS là một kỹ thuật đáng tin cậy, chính xác và có thể được sử dụng nhưmột phương pháp phân tử bổ sung bên cạnh phương pháp sinh hoá trong việc chẩn đoán bệnh thay vì dùngphương pháp ARMS thông thường. Từ khóa: G6PD, Tetra-ARMS, ARMS, đột biến Canton, so sánh, độ đặc hiệu,độ chính xác.ABSTRACTOPTIMIZING TETRA- ARMS PCR FOR THE DETECTION OF CANTON MUTATION IN GLUCOSE-6- PHOSPHATE DEHYDROGENASE DEFICIENCY (G6PD DEFICIENCY) Nguyen Vu Hoang Uyen*, Nguyen Thi Hue, Dang Thi Lan Anh * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 19 - No 5 - 2015: 297 - 305 Background: Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency is the most common enzyme defect inhuman erythrocytes with a lot of serious manifestations, especially in newborns. Since this is a genetic disease, soearly detection of causative mutations is significant for the prevention and treatment of severe symptoms.Therefore, the objective of this project is to optimize the Tetra-ARMS PCR method for detecting Canton mutation– one of the point mutations causing G6PD deficiency. Methods: The main and primary task of this study is optimizing the key components of Tetra-ARMS PCR.The size for genotyping of Canton mutation in G6PD deficiency is thirty samples including homozygote andheterozygote which were genotyped by ARMS PCR assay. After all the essential work done, results analysis and * Trường ĐH Quốc Tế, ĐHQG Tp.Hồ Chí Minh ** Trường ĐH Khoa học Tự nhiên, ĐHQG Tp. Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS. Đặng Thị Lan Anh ĐT: 0932.040.074 Email: dtlananh88@gmail.com 297Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 19 * Số 5 * 2015final DNA sequencing outcomes are two evidences to prove that Tetra-ARMS PCR is surpassing thanconventional ARMS PCR. It means that both specificity and accuracy of Tetra primer ARMS PCR are higherthan ARMS-PCR. Results: In 13.33% disagreement of genotype between the two methods, Tetra primer ARMS PCRrepresented 100% agreement with ADN sequencing results, while conventional ARMS PCR techniquecontradicted all four discordant samples. Conclusion: Tetra primer ARMS PCR method is a reliable and accurate technique and it is suggested that itcan be used as a complementary method beside biochemical tests for diagnostic cases instead of conventionalARMS PCR method. This suggestion originated with perfect rate of agreement between Tetra-ARMS outcomeswith the ones. For future research, this study will be useful for later accuracy improvement, sensitivity test andenhancement of Tetra-ARMS PCR. Key words: G6PD, Tetra-ARMS, ARMS, Canton mutation, validating, specificity, accuracy.GIỚI THIỆU cầu, điều kiện bên ngoài và có thể dẫn đến kết quả dương tính giả hoặc âm tính giả(11,15). Hơn Thiếu men G6PD được xem là một trong nữa, các xét nghiệm này cũng rất khó để phátnhững bệnh lý khiếm khuyết enzyme ở h ...