Trình tự Nucleotid đặc thù trong exon 2 gen myostatin của bò Lai sind và bò Vàng Việt Nam

Gen myostatin bò nằm ở đầu ngoài nhiễm sắc thể số 2, chứa 3 exon và 2 intron. Myostatin đã được xác nhận như là nhân tố ảnh hưởng đến tỷ lệ thịt xẻ của bò thịt (double muscling) là do các đột biến trong vùng mã hoá làm cho gen bất hoạt, dẫn đến không có khả năng ức chế sự phát triển của sợi cơ [1].
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Trình tự Nucleotid đặc thù trong exon 2 gen myostatin của bò Lai sind và bò Vàng Việt Nam Trình t Nucleotid c thù trong exon 2 gen myostatin c a bò Lai sind và bò Vàng Vi t Nam Tr n Xuân Hoàn*, Ph m Ng c Uy n, Ph m Th Phương Mai và Tr n Xuân Toàn Phòng thí nghi m tr ng i m t bào ng v t Vi n Chăn nuôi * Tác gi liên h : Tr n Xuân Hoàn, Phòng thí nghi m tr ng i m t bào ng v t Tel: (04) 2.166.165/ 0914.873.684; Fax: (04) 8.389.775. Email: Tranxuanhoan@yahoo.com.vn ABSTRACT The specific nucleotide sequence in the exon 2 of the myostatin gene of Lai sind cattle and Yellow cattle were reared in Vietnam A pair of PCR primers was used to amplify the exon 2 of myostatin gene of cattle breed: Lai sind andYellow were reared in Vietnam. The 374 bp nucleotide sequence in the exon 2 of the myostatin gene wasdetermined. The amino axit sequence deduced from the nucleotide sequence of Lai sind & Yellow cattlewas well conserved with it’s sequence of other cattle breed, however it was found that a C-G transition atnucleotide position 374 results in the substitution of serine by cysteine at amino axit position 125, an A-Ctransition at nucleotide position 443, results in the substitution of tyrosine by serine at amino axit position148 with the same frequence 0.1. There are two other mutations were revealed at nucleotide positions 414T-C transition and 478 C-T transition with frequence 0.9 and 0.83 respectively, but these mutations do notchange amino axit sequence. There are three specific mutations at nucleotide 374, 443 and 478 of Lai sindand Yellow cattle. Keywords: nucleotide, exon 2, myostatin gene, Lai sind, yellow cattle. tv n Gen myostatin bò n m u ngoài nhi m s c th s 2, ch a 3 exon và 2 intron.Myostatin ã ư c xác nh n như là nhân t nh hư ng n t l th t x c a bò th t(double muscling) là do các t bi n trong vùng mã hoá làm cho gen b t ho t, d n nkhông có kh năng c ch s phát tri n c a s i cơ [1]. Các k t qu nghiên c u ã phát hi n ra 10 ki u t bi n các gi ng bò khác nhau,trong ó có m t t bi n x y ra trong exon 1 là F94L; 3 t bi n trong exon 3 là nt821(del11); E291X; C313Y và 6 t bi n x y ra trong exon 2 là nt 414 C-T; nt419 del7ins10; Q204X; D182N; N214S; E226X [1,3,4]. K t qu trên cho th y trong exon 2 gen myostatin c a bò có nhi u t bi n và có khnăng làm tăng t l th t x c a bò. Tuy nhiên nghiên c u trư c ây c a chúng tôi b ng kthu t PCR-RFLP chưa phát hi n ư c các d ng t bi n Q204X và E226X trong exon 2c a bò Lai sind và bò Vàng Vi t Nam. i u này cho th y kh năng bò Lai sind và bò Vàng có c u trúc c thù riêng bi ttrong exon 2 c a gen myostatin so v i các gi ng bò th t c a nư c ngoài. Trong khi óki u t bi n làm tăng th t x xu t hi n v i t n s cao m t s gi ng bò như BelgianBlue; Peidmontese và South Devon [1,5]. Do ó xác nh s sai khác di truy n, làm cơs khoa h c phát tri n và ng d ng k thu t PCR - RFLP vào vi c ánh giá nh hư ngc a gen myostatin n kh năng cho th t c a các gi ng bò n i trong công tác ch n l c vàlai t o các gi ng bò th t có t l th t x cao, chúng tôi ã ti n hành gi i trình t o n gench a toàn b exon 2 gen myostatin.V t li u và phương pháp nghiên c u i tư ng nghiên c u i tư ng nghiên c u là bò Lai sind và bò Vàng nuôi ông Anh, Hà N iPhương pháp nghiên c u L y m u máu: Máu bò l y kho ng 0,5ml và ư c ch ng ông b ng dung d ch 0,5MEDTA theo t l 1 EDTA: 20 máu. Tách ADN: M i m u máu ã ư c ch ng ông l y 200µl tách ADN theo kit c ahãng Fermentas. Ph n ng PCR o n ADN ch a exon 2 gen myostatin c a bò Lai sind và bò Vàng ư c nhân lên tcác c p m i LL có trình t như sau 5’- GTTCATAGATTGATATGGAGGTGTTCG-3’ Xuôi 5’- ATAAGCACAGGAAACTGGTAGTTATT-3’ Ngư c Trư c khi th c hi n ph n ng PCR, ADN ư c bi n tính 950 C trong 4 phút. Sau ó ph n ng PCR ch y 30 chu kỳ, m i chu kỳ có chu trình nhi t như sau: 950 C trong 60s 600 C trong 60s 720 C trong 60s K t thúc ph n ng ư c kéo dài 5 phút 720 C S n ph m PCR ư c tinh s ch theo kit MicroSpinTM S-200 HR columns cuAmersham Biosiences, sau ó ư c th c hi n ph n ng gi i trình t v i m i xuôi vàngư c riêng bi t. Tinh s ch ph n ng gi i trình t và ti n hành gi i trình t trên máy t ng ABI. Sai khác trình t nucleotide ư c phân tích b ng ph n m m: Genetyx-Win (Version4.0). K t qu và th o lu n o n ADN ch a exon 2 gen myostatin c a bò Lai sind và bò Vàng ư c nhân lên tc p m i LL do Karim & CS (2000) thi t k . có m i xuôi b t u t nucleotid 2286 vàm i ngư c b t u t nucleotid 2840 trên trình t gen myostatin c a bò ã ư cJeanplong & CS (2001) thi t k . Do v y kích thư c mong i s có chi u dài lá 555 bp. K t qu gi i trình t s n ph m PCR t c p m i LL c a chúng tôi thu ư c o n ADNcó kích thư c phù h p k t qu gi i trình t c a Jeanplong & CS (2001). Nhưng n u sov i k t qu gi i trình t gen myostatin bò c a Shibata & CS (2003) chúng tôi th y thi um t nucleotid T trong intron 1 là do v trí 2343 - 2349 ch có 7 nucleotid T ư c l p l i,trong khi ó theo k t qu c a Shibata, 2003 t i các v trí trên có 8 nucleotid T l p l i. Chi u dài o n ADN nhân lên t c p m i LL tuy có sai khác m t nucleotid trongintron 1, nhưng chi u dài exon 2 không có s sai khác gi a k t qu gi i trình t c achúng tôi v i k t qu c a Jeanplong (2001) và Shibata (2003). Chi u dài exon 2 genmyostatin c a bò là 374 bp. K t qu ư c th hi n qua hình 1. gttcatagat tgatatggag gtgttcgttc atttttcata aaaatgatct tagtaacttt ttttcttatt catttatagc tgatcttcta acgcaagtgg aaggaaaacc caaatgttgt ttctttaaat ttagctctaa g ...