Ứng dụng kỹ thuật chuỗi polymerase (PCR) phát hiện một số loài bifidobacterium trong thực phẩm chức năng và thực phẩm bổ sung

Bài viết khảo sát các thông số của qui trình PCR để phát hiện 4 loài Bifidobacterium trong thực phẩm chức năng và thực phẩm bổ sung.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Ứng dụng kỹ thuật chuỗi polymerase (PCR) phát hiện một số loài bifidobacterium trong thực phẩm chức năng và thực phẩm bổ sung Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 5 * 2019 Nghiên cứu Y học ỨNG DỤNG KỸ THUẬT CHUỖI POLYMERASE (PCR) PHÁT HIỆN MỘT SỐ LOÀI BIFIDOBACTERIUM TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG VÀ THỰC PHẨM BỔ SUNG Ngô Thanh Phong* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Hiện nay, việc định danh một số loài Bifidobacterium spp. trong thực phẩm chức năng và bổ sung bằng phương pháp nuôi cấy vi sinh truyền thống còn hạn chế. Phương pháp PCR được đề xuất để nghiên cứu triển khai định danh một số loài Bifidobacterium spp. trong thực phẩm chức năng và thực phẩm bổ sung. Mục tiêu: Khảo sát các thông số của qui trình PCR để phát hiện 4 loài Bifidobacterium trong thực phẩm chức năng và thực phẩm bổ sung. Phương pháp nghiên cứu: Khảo sát quy trình tách chiết; khảo sát độ đặc hiệu của mồi; tối ưu hóa điều kiện phản ứng PCR; khảo sát mức phát hiện LOD50 ; ứng dụng quy trình phân tích một số mẫu thực tế. Kết quả: Chúng tôi đã lựa chọn được 5 cặp mồi đặc hiệu trong đó có 4 cặp mồi phát hiện 4 loài Bifidobacterium bao gồm B. animalis, B. breve, B. bifidum, B. lactis LOD50 của các qui trình PCR để phát hiện các loài Bifidobacterium spp. đều ở mức thấp (dưới 2 CFU/g) bao gồm: mẫu thực phẩm chức năng từ 1 CFU/g (B. bifidum, B. lactis) đến 1,4 CFU/g (B. breve, B. animalis); từ 1 CFU/g (B. animalis, B. breve) đến 1,3 CFU/g (B. lactis, B. bifidum) trong nền mẫu thực phẩm bổ sung. Phương pháp có độ chọn lọc tốt, chỉ phát hiện đặc hiệu trên chủng mục tiêu. Kết luận: quy trình PCR này có thể áp dụng để phát hiện 4 loài vi khuẩn Bifidobacterium trong thực phẩm chức năng và thực phẩm bổ sung. Từ khóa: bifidobacterium, phản ứng PCR, probiotic ABSTRACT APPLICATION OF POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR) METHOD TO IDENTIFY SOME BIFIDOBACTERIUM SPECIES IN FUNCTIONAL FOODS AND DIETARY SUPPLEMENTS Ngo Thanh Phong * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 – No. 5 - 2019: 625 – 632 Background: Currently, traditional methods to identify Bifidobacterium species are limited and methods based on molecular biology are considered potential solutions. PCR method was proposed to study and identify some Bifidobacterium species in dietary supplements and function foods. Objectives: Develop PCR method to identify 4 Bifidobacterium species in functional foods and dietary supplements. Methods: Select the extraction procedures; assess the primers’ specificity; optimize PCR conditions; survey the detection level (LOD50) of the method; apply method to analyse samples. Results: 5 specific primers were selected for identification 4 Bifidobacterium species, including: B. animalis, B. breve, B. bifidum, B. lactis. The detection levels (LOD50) of these PCR methods are low (below