Ứng dụng kỹ thuật Multiplex PCR chẩn đoán Escherichia coli gây tiêu chảy ở người

Bài viết được nghiên cứu với mục tiêu nhằm phát hiện gen độc lực eae, sxt và ipaH ở các chủng E. coli phân lập từ bệnh nhân (BN) tiêu chảy bằng phản ứng multiplex-PCR. Mời các bạn cùng tham khảo tài liệu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Ứng dụng kỹ thuật Multiplex PCR chẩn đoán Escherichia coli gây tiêu chảy ở ngườiT¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 2-2018ỨNG DỤNG KỸ THUẬT MULTIPLEX-PCR CHẨN ĐOÁNESCHERICHIA COLI GÂY TIÊU CHẢY Ở NGƯỜINguyễn Đắc Trung*; Nguyễn Thị Thu Thái*; Trần Quang Cảnh**TÓM TẮTMục tiêu: phát hiện gen độc lực eae, sxt và ipaH ở các chủng E. coli phân lập từ bệnh nhân(BN) tiêu chảy bằng phản ứng multiplex-PCR. Đối tượng và phương pháp: 4 chủng chuẩnE. coli (EPEC, EIEC, EHEC và EC) và 23 chủng E. coli phân lập từ BN tiêu chảy đã được táchADN tổng số trực tiếp từ khuẩn lạc vi khuẩn. Khuếch đại gen eae, sxt và ipaH ở các chủngchuẩn E. coli bằng phản ứng PCR và multiplex-PCR. Sử dụng phản ứng multiplex-PCR với cáccặp mồi tương tự để phát hiện đồng thời gen eae, sxt và ipaH từ ADN genome các chủngE. coli phân lập từ BN tiêu chảy. Kết quả và kết luận: khuếch đại thành công gen độc lực eae,sxt và ipaH ở các chủng chuẩn EPEC, EIEC và EHEC bằng phản ứng PCR và multiplex-PCR.Với phản ứng multiplex-PCR, đã xác định được 9/23 chủng E. coli phân lập từ BN tiêu chảy cómang gen độc lực. Trong đó 2 chủng vi khuẩn thuộc nhóm EPEC (mang gen eae), 4 chủngthuộc nhóm EIEC (mang gen sxt) và 3 chủng thuộc nhóm EHEC (mang đồng thời gen eae và sxt).* Từ khóa: E. coli; Multiplex-PCR; Gen eae, sxt, ipaH.Multiplex-PCR Assay for Identification of Human DiarrheagenicEscherichia coliSummaryObjectives: To identify virulent gene of eae, sxt and ipaH in the strains of E. coli isolated fromdiarrhea patients by multiplex-PCR assay. Subjects and methods: Four E. coli strains (EPEC,EIEC, EHEC and EC) and 23 strains of E. coli isolated from diarrhea patients were subjected toextract total DNA from bacterial colonies. Amplification of eae, sxt and ipaH genes in thestandard E. coli strains were carried out by PCR and multiplex PCR. Multiplex-PCR assays withsimilar primer pairs were used to simultaneously detect eae, sxt and ipaH genes from thegenomic DNA of E. coli strains isolated from diarrhea patients. Results and conclusions: Eae,sxt and ipaH genes were successfully amplified in EPEC, EIEC and EHEC strains by PCR andmultiplex-PCR. By using multiplex-PCR, 9 out of 23 strains of E. coli isolated from diarrheapatients were identified. Two strains of EPEC (possessed single eae, four strains of EIEC(carried single sxt) and three strains of EHEC (possessed both eae and sxt).* Keywords: E. coli; Multiplex-PCR; Gene eae, sxt, ipaH.* Trường Đại học Y-Dược Thái Nguyên** Trường Đại học Kỹ thuật Y tế Hải DươngNgười phản hồi (Corresponding): Nguyễn Đắc Trung (dactrung69@gmail.com)Ngày nhận bài: 31/10/2017; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 10/01/2018Ngày bài báo được đăng: 24/01/201832T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 2-2018ĐẶT VẤN ĐỀCó nhiều tác nhân đường ruột gây tiêuchảy đã được ghi nhận như virut, vi khuẩn,ký sinh trùng. Trong số các vi khuẩn,nhóm E. coli gây tiêu chảy thường gặphơn cả ở các nước đang phát triển [4].Dựa trên đặc điểm độc lực, các chủngE. coli gây tiêu chảy ở người được phânthành nhóm STEC (shiga toxin producingE. coli), ETEC (enterotoxigenic E. coli),EPEC (enteropathogenic E. coli), EIEC(enteroinvasiveE.coli),EHEC(enterohemorrhagic E. coli), EaggEC(enteroaggregative E. coli) và DAEC(diffusely adherent E. coli) [7]. Nhữngbệnh lý tiêu chảy do E. coli có sự phốihợp của gen độc lực khác nhau giúp chovi khuẩn gắn bám, giải phóng yếu tố tanmáu và độc tố ruột. Có sự khác biệt đángkể về trình tự và đa hình thái trong tínhđồng nhất phân tử của gen mã hóa chocác yếu tố độc lực này. Trong số các genđộc lực của nhóm E. coli gây tiêu chảyphải kể đến ipaH - một gen nằm trênnhiễm sắc thể và plasmid, mã hóa chomột kháng nguyên 60 kDa và phát hiện ởcác chủng EIEC; gen nhiễm sắc thể eae(E. coli attaching and effacing) mã hoácho một protein màng ngoài có trọnglượng phân tử 94 - 97 kDa, được gọi làintimin, protein này đóng vai trò quantrọng trong định vị vi khuẩn ở ruột. Intimingây tổn thương dạng bám dính và pháhuỷ ở đại tràng do vi khuẩn bám chặt vàotế bào biểu mô. Gen eae hiện diện ở tấtcả các chủng EPEC, EHEC; các chủngEHEC còn tạo ra cytotoxin, còn gọi là độctố Shiga sxt (Shiga toxins). Kỹ thuậtmultiplex-PCR được phát triển để pháthiện đồng thời vài gen độc lực của E. colitrong một phản ứng PCR, những kỹ thuậtnày cho độ nhạy và độ đặc hiệu cao trongphát hiện các chủng E. coli gây tiêu chảyở người [1, 2, 5, 6, 8]. Việc xác định cácchủng E. coli gây tiêu chảy tại Bệnh việnTrung ương Thái Nguyên mới chỉ dựatrên thử nghiệm hóa sinh. Vì vậy, chưathể khẳng định chắc chắn những chủng vikhuẩn này có thực sự gây tiêu chảy,mang gen độc lực hay không?. Đề tàiđược thực hiện nhằm mục tiêu: Phát hiệngen độc lực eae, sxt và ipaH ở các chủngE. coli phân lập từ BN bị tiêu chảy bằngphản ứng multiplex-PCR.ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Đối tượng nghiên cứu.4 chủng E. coli chuẩn quốc tế doPhòng Vi khuẩn Đường ruột, Viện Vệ sinhDịch tễ Trun ...