Xác định giá trị sử dụng phương pháp PCR để phát hiện Vibrio cholerae trong mẫu thủy hải sản

Vibrio Cholerae là một trong những tác nhân gây bệnh tiêu chảy nguy hiểm lây truyền qua đường nước và thực phẩm. Việc xác định bằng kỹ thuật sinh học phân tử, phương pháp PCR, là cần thiết nhằm đáp ứng nhanh cho công tác phát hiện sớm vi sinh gây bệnh trong thực phẩm, giúp phát hiện kịp thời bệnh tiêu chảy do Vibrio cholerae gây ra thông qua thực phẩm.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xác định giá trị sử dụng phương pháp PCR để phát hiện Vibrio cholerae trong mẫu thủy hải sảnY Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 5 * 2016 Nghiên cứu Y học XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ SỬ DỤNG PHƯƠNG PHÁP PCR ĐỂ PHÁT HIỆN VIBRIO CHOLERAE TRONG MẪU THỦY HẢI SẢN Nguyễn Đỗ Phúc*TÓM TẮT Đặt vấn đề: Vibrio Cholerae là một trong những tác nhân gây bệnh tiêu chảy nguy hiểm lây truyền quađường nước và thực phẩm. Việc xác định bằng kỹ thuật sinh học phân tử, phương pháp PCR, là cần thiết nhằmđáp ứng nhanh cho công tác phát hiện sớm vi sinh gây bệnh trong thực phẩm, giúp phát hiện kịp thời bệnh tiêuchảy do Vibrio cholerae gây ra thông qua thực phẩm. Mục tiêu nghiên cứu: Xác định giá trị sử dụng của phương pháp PCR phát hiện Vibrio choleare trong thủyhải sản. Phương pháp: Khảo sát độ chọn lọc và độ đặc hiệu của phương pháp PCR. Đánh giá các thông số kỹ thuậtcủa phương pháp PCR: giới hạn phát hiện, độ nhạy tương đối, độ chính xác tương đối, độ đặc hiệu tương đối, tỷlệ dương tính giả và âm tính giả theo ISO/TS 16140 (2003) và NordVal (2009). Kết quả: Giới hạn phát hiện 50% (LOD50) của phương pháp PCR trên các nền mẫu (nghêu: 1-3CFU/25g, sò: 0-1 CFU/25g và hến: 4- 6 CFU/25g). Riêng mẫu hàu chưa đạt yêu cầu (>9 CFU/25g). Cácthông số kỹ thuật của phương pháp PCR: Độ chính xác (AC), độ đặc hiệu (SP), độ chọn lọc (SE) trên 3 nềnmẫu nghêu, sò và hến với tỷ lệ dương tính giả (FP) và âm tính giả (FN) đạt yêu cầu theo tiêu chuẩnISO/TS 16140 (2003) và NordVal (2009). Kết luận: Phương pháp PCR có thể ứng dụng để phát hiện Vibrio cholerae trong mẫu thủy hải sản với nềnmẫu nghêu, sò và hến. Từ khóa: PCR, Vibrio cholerae, thủy hải sảnABSTRACT VALIDATION OF PCR METHOD FOR DETECTION OF VIBRIO CHOLERAE IN SEAFOOD Nguyen Do Phuc * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement of Vol. 20 - No 5 - 2016: 369 - 373 Background: Vibrio cholerae is one of the dangerous diarrheal pathogen transmitted through water and food.Applying a molecular method, polymerase chain reaction (PCR), is necessary for early detection of Vibrio choleraeinfection through foods. Objectives: To assess validation of PCR method for detection of Vibrio cholera in seafood. Methods: Identify selectivity and validation of PCR method for detection of Vibrio cholerae in seafood withparameters: Limit detection 50 (LOD50), Sensitivity (SE), Specificity (SP), Accuracy (AC) False Positive (FP)and False Negative (FN) according to ISO/TS 16140 (2003) and NordVal (2009). Results: Limit of detection 50 (LOD50) were for clam (1-3 CFU/25 g), mussel (0-1 CFU/25g), baby clam (4-6 CFU/25g), but oyster did not meet the requirement (>9 CFU/25g). Technical parameters: Accuracy (AC);Specificity (SP); Sensitivity (SE) False Positive (FP) and False Negative (FN) of PCR method on the threesamples met the standard requirements. Conclusion: PCR is an applicable method for detection of Vibrio cholerae in seafood, especially in clam,mussel and baby clam. * Viện Y tế công cộng TP. Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: TS. Nguyễn Đỗ Phúc ĐT: 0907669008 Email: nguyendophucihph@gmail.comChuyên Đề Y Tế Công Cộng 369Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 5 * 2016 Key words: PCR, Vibrio cholerae, seafood.ĐẶT VẤN ĐỀ áp dụng tại nhiều phòng thí nghiệm như AOAC 988-20:2010, FDA (chương 9), TCVN 7905-1:2008 Bệnh tả là một bệnh truyền nhiễm cấp tính [ISO 21872-1:2007(E)]. Tuy nhiên, phương phápđường tiêu hoá do phẩy khuẩn tả (Vibrio cholerae) nuôi cấy đòi hỏi nhiều ngày, chưa đáp ứnggây nên. Bệnh thường biểu hiện với những triệu nhanh cho công tác tìm nguyên nhân tiêu chảychứng lâm sàng đột ngột, nhanh và nặng. Nếu do tả.không được điều trị kịp thời sẽ dẫn tới tử vong PCR là phương pháp được lựa chọn đểtrong vài giờ và được xếp vào loại bệnh “cực kỳ phát hiện nhanh V. cholerae trên cơ sở phátnguy hiểm”. hiện đoạn gen ctxAB gây ra bệnh tả với thời Theo số liệu của Tổ chức Y tế thế giới gian nhanh trong vòng 24 giờ. Để có cơ sở(WHO), hiện nay vẫn còn khoảng hơn 30 nước chứng minh được năng lực của phòng thícó bệnh tả đang lưu hành, chủ yếu là ở Châu Á nghiệm có thể áp dụng phương pháp PCRvà Châu Phi. Mỗi năm ước tính trung bình có ...