Xây dựng quy trình mulitplex real-time RT-PCR định lượng đồng thời mRNA PCA3 và PSA trong nước tiểu

Bài viết trình bày việc xây dựng quy trình mulitplex real-time RT-PCR định lượng đồng thời mRNA PCA3 và PSA trong nước tiểu. Quy trình có thể được sử dụng để định lượng mRNA PCA3 và PSA. Cần tiến hành thử nghiệm trên nhiều mẫu bệnh để xác định giá trị ngưỡng của chỉ số PCA3 nhằm ứng dụng trong tầm soát UTTLT.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng quy trình mulitplex real-time RT-PCR định lượng đồng thời mRNA PCA3 và PSA trong nước tiểuY Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016 Nghiên cứu Y học XÂY DỰNG QUY TRÌNH MULTIPLEX REAL-TIME PCR ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI mRNA PCA3 VÀ PSA TRONG NƯỚC TIỂU Huỳnh Nhã Vân*, Lê Phúc Liên**, Trần Lê Linh Phương**, Hồ Huỳnh Thùy Dương***TÓM TẮT Tổng quan: PCA3 (Prostate Cancer Antigen 3) là gene mã hóa mRNA đặc hiệu cho tiền liệt tuyến và đượcbiểu hiện cao trong ung thư tiền liệt tuyến (UTTLT). Tỉ lệ giữa nồng độ mRNA PCA3 và PSA (Prostate-Specific Antigen) trong nước tiểu, chỉ số PCA3, đã được chứng minh là có độ đặc hiệu với UTTLT cao hơn sovới xét nghiệm PSA trong huyết thanh. Mục tiêu: Xây dựng quy trình mulitplex real-time RT-PCR định lượng đồng thời mRNA PCA3 và PSAtrong nước tiểu. Phương pháp: Quy trình multiplex được xây dựng dựa trên monoplex PCA3 và PSA đã tối ưu hóa cácthông số nhiệt độ lai và nồng độ mồi. Sau đó, quy trình multiplex được thử nghiệm trên 6 mẫu nước tiểu bệnhnhân và chỉ số PCA3 được tính dựa theo công thức đã công bố. Kết quả: Quy trình multiplex real-time RT-PCR có hiệu quả nhân bản đạt 90-105% với hệ số xác định(R2) của đường chuẩn đạt > 0,980. PCA3 và PSA được phát hiện và định lượng trên 100% các mẫu bệnh nhân. Kết luận: Quy trình có thể được sử dụng để định lượng mRNA PCA3 và PSA. Cần tiến hành thử nghiệmtrên nhiều mẫu bệnh để xác định giá trị ngưỡng của chỉ số PCA3 nhằm ứng dụng trong tầm soát UTTLT. Từ khóa: PCA3, PSA, mRNA, chỉ số PCA3, ung thư tiền liệt tuyến .ABSTRACT ESTABLISHMENT OF A MULTIPLEX REAL-TIME PCR FOR SIMULTANEOUS QUANTITATION OF URINE PCA3 AND PSA mRNA Huynh Nha Van, Le Phuc Lien, Tran Le Linh Phuong, Ho Huynh Thuy Duong * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement of Vol. 20 - No 2 - 2016: 83 - 87 Introduction: PCA3 (Prostate Cancer Antigen 3) encodes a prostate-specific mRNA that has been shownto be up-regulated in prostate cancer (PCa). PCA3 score, the ratio of PCA3 mRNA copies to PSA (Prostate-Specific Antigen) mRNA copies in urine, has been shown to have higher PCa specificity compared to serumPSA test. Objectives: The present study aimed to establish a multiplex real-time RT-PCR for quantification of PCA3and PSA mRNA. Methods: Multiplex real-time RT-PCR was constructed based on PCA3 and PSA singleplex withoptimized annealing temperature and primer concentrations. The multiplex assay was then tested on patients’urine samples and PCA3 score was calculated. Results: Multiplex amplification efficiencies were between 90-105% with coefficient of determination (R2)of more than 0.980. PCA3 and PSA mRNA were detected and quantified in 100% urine samples. Conclusions: Further study on larger population is necessary to determine PCA3 score cut-off value for  Công ty TNHH Công nghệ sinh học Khoa Thương   Bệnh viện Đại học Y Dược TP.HCM Trường Đại học Khoa học Tự nhiên TPHCM Tác giả liên lạc: ThS. Huỳnh Nhã Vân. ĐT: 0932140123. Email: huynhnhavan@gmail.comHội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Đại Học Y Dược TP. Hồ Chí Minh 2016 83Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016PCa screening. Key words: PCA3, PSA, mRNA, PCA3 score, prostate cancer.ĐẶT VẤN ĐỀ gene được xem là có biểu hiện tương đối ổn định trong tế bào TLT(2). Các thử nghiệm đề Ung thư tiền liệt tuyến (UTTLT) là dạng xuất hiện nay để đo hàm lượng mRNA PCA3ung thư phổ biến thứ hai và là nguyên nhân và PSA sử dụng các phương pháp nhân bảntử vong do ung thư đứng hàng thứ sáu ở nam mRNA luân nhiệt hay đẳng nhiệt như real-timegiới trên thế giới. Tuy nhiên, tỷ lệ mắc UTTLT RT-PCR, TMA (Transcription Mediatedthay đổi theo khu vực địa lý, với tỉ lệ rất cao ở Amplification), NASBA (Nucleic Acidcác nước phát triển gồm Châu Úc, Bắc Mỹ, Sequence-Based Amplification) và tiến hànhChâu Âu; tỉ lệ thấp nhất thuộc về các nước trên nước tiểu. Kit PROGENSA® PCA3 (Gen-Bắc Phi, Đông và Nam Á. Mặc dù vậy, tỉ lệ Probe) dựa trên nguyên lý phương pháp TMAmắc phải ở đang có khuynh hướng gia tăng ở đã được FDA cấp phép dùng trong xét nghiệmphần lớn các quốc gia(1). Tại Việt Nam, tỉ lệ UTTLT ở Mỹ.mắc phải tăng từ 2,47 lên 4,7/100.000 người từ Nhằm ứng dụng trong sàng lọc UTTLT ởnăm 2000 đến 2010(3). Việt Nam, chúng tôi tiến hành xây dựng quy V ...