Atlas de poche d immunologie - part 4

Kháng nguyên-kháng thể phản ứng A. Immunohistological nhuộm của mẫu mô để đánh giá mô học thường cố định trong formalin. Tuy nhiên, thủ tục này làm thay đổi quyết định kháng nguyên của nhiều cấu trúc di động được ưa thích trong các phần cryostat chuẩn bị từ các mẫu đông lạnh nhanh chóng cho immunohistology
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Atlas de poche d immunologie - part 4Réactions antigènes-anticorps B. Hybridation fluorescente in situA. Colorations immunohistologiques (FISH)Les échantillons de tissus destinés à lévaluationhistologique sont en général fixés dans du for- Cette méthode permet la détection spécifique d molécules dADN ou dARN. Un traitement namol. Néanmoins, cette procédure altérant lesdéterminants antigéniques de nombreuses struc- certains réactifs chimiques, une température éle vée ou un pH alcalin font dissocier les deuxtures cellulaires, on préfère les sections prépa- brins de lADN. On peut synthétiser ou obtenirées au cryostat à partir déchantillons congelésrapidement pour limmunohistologie. Ces sec- des sondes spécifiques, cest-à-dire des frac.tions sont dabord incubées pendant 20 à 30 ments dADN complémentaires à une séquence choisie, qui sont couplées à un fluorochronieminutes à 4 °C avec des anticorps, majoritaire-ment des anticorps monoclonaux murins, spéci- Les sondes marquées shybrident à lADN defiques de lantigène choisi ; après des étapes de léchantillon, le fluorochrome rendant cettelavage, lincubation avec un anticorps secon- hybridation visible. On dispose également dedaire contre les Ig de souris a lieu. On se sert sondes spécifiques dARN : il est possible defréquemment danticorps secondaires biotinylés, détecter lARN correspondant à certains pro-cest-à-dire couplés à la biotine. La biotine pos- duits cellulaires tels que les cytokines au niveau dune cellule individuelle. Outre les moléculessède une affinité extrêmement élevée pour la fluorescéine et biotine, on utilise dautres com-protéine streptavidine ; cette dernière est ajoutéesous forme dun complexe associé à lenzyme plexes immuns comme marqueurs (par exemple digoxigénine-anti-digoxigénine).peroxydase, marquant ainsi lantigène cible parcette enzyme. Après lajout dun substrat chro- C. Exemple dune coloration de typemogène tel que la diaminobenzidine (DAB) ou FISH dans une translocation 8:21lamino-éthylcarbazole (AEC), une reactioncolorante est déclenchée qui reflète précisément Pendant linterphase dune cellule normale, on peut visualiser le gène ETO sur le chromosomela distribution de lantigène dans le tissu. 8 et le gène AML-1 sur le chromosome 21 à La méthode APAAP est également très répan- laide de sondes dADN marquées respective-due : après fixation de lanticorps primaire à ment à la FITC ou à la PE. La sonde utiliséelantigène, on ajoute dabord un anticorps anti- pour détecter le gène AML-1 est complémen-Ig de souris (« anticorps de pont»), puis un com- taire dun long segment dADN. Dans certainsplexe formé par lenzyme phosphatase alcaline cas de leucémies aiguës lymphoblastiques (voir(PA) et un anticorps monoclonal de souris p. 116), on observe une translocation dun frag-contre la phosphatase alcaline (anti-PA). Par ment du chromosome 21 sur le chromosome 8 etlintermédiaire des anticorps «de pont» et pri- vice versa. Cet événement place une partie dumaire, ce complexe se lie à lantigène cible ; la gène AML-1 détecté par la sonde marquée à laréaction enzymatique avec le substrat chromo- FITC à proximité du gène ETO marqué à la PB.gène provoque enfin une précipitation colorée La fusion des deux gènes devient alors visibledépendant de lantigène dans le tissu. La sen- par des signaux rouges et verts avoisinants.sibilité de détection peut être accrue par unerépétition de la reaction de «pont». Deux illus-trations mont ...