Bài giảng Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật

Bài giảng Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật tập trung tìm hiểu về các phương pháp chuyển gen không sử dụng virus; các phương pháp chuyển gen sử dụng virus; ứng dụng của phương pháp chuyển gen vào tế bào động vật. Với các bạn chuyên ngành sinh học thì đây là tài liệu hữu ích.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài giảng Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vậtCác kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật 1Nội dung bài học Mở đầu Các phương pháp chuyển gen không sử dụng virus Các phương pháp chuyển gen sử dụng virus Ứng dụng Kết luận 2Mở đầu Dự án giải mã bộ gen Người (Human Genome Project, 1990 – 2003)  Hiểu biết rõ ràng hơn về bộ gen Người  Cải tiến về các phương pháp chuẩn đoán, điều trị trên từng cá thể  Liệu pháp gen 3Mở đầu Liệu pháp gen là việc áp dụng các nguyên lí di truyền trong điều trị bệnh lí trên người Liệu pháp gen = chuyển vật liệu di truyền vào tế bào với các mục tiêu  Thay thế cho các gen mất chức năng  Ức chế sự biểu hiện của gen bệnh  Tiêu diệt tế bào bệnh bằng gen tự sát  … 4Mở đầu Mô hình liệu pháp gen 5 Mở đầu Chiến lược chuyển gen  In vivo  Ex vivo 6Mở đầu Các phương pháp chuyển gen  Phương pháp chuyển gen sử dụng virus  Phương pháp chuyển gen không sử dụng virus  Phương pháp hóa học  Phương pháp vật lí 7 Phương pháp Chuyển gen bằng virus  Khả năng xâm nhiễm đa dạng và chuyên biệt  Gắn chèn gen mục tiêu vào bộ gen của tế bào chủ  biểu hiện ổn định protein mục tiêu  Retrovirus, Herpesvirus, Adenovirus, Lentivirus, … 8Phương pháp Quá trình sao chép của virus 9 Chuyển gen sử dụng virus  Chiến lược sử dụng vector virus  Giai đoạn 1: tạo vector virus Tín hiệu đóng gói Gen mục tiêu Vector DNA Helper DNA Virus hoang dại Gen cần thiết của virus Protein virusTế bào đóng gói Protein virus Vector retrovirus 10Chuyển gen sử dụng virus  Giai đoạn 2: quá trình xâm nhiễm Vector trần vectorVector tồn Vector gắn tại trong chèn vào nhân NSTTế bào mục tiêu mRNA và Protein trị liệu 11Chuyển gen sử dụng virus Retrovirus Cấu tạo  Vỏ  Thụ thể Glycoprotein  Lõi  Protein lõi  Vật liệu di truyền  Các enzym 12 Chuyển gen sử dụng virus Retrovirus 13 Chuyển gen sử dụng virus Retrovirus  Ưu điểm  Gắn chèn gen mục tiêu vào NST của tế bào quan tâm  biểu hiện gen mục tiêu ổn định  Ít nhạy cảm với hệ miễn dịch  Sử dụng đối với các dòng tế bào phân chia mạnh  Khuyết điểm  Gắn chèn gen mục tiêu một cách ngẫu nhiên  Không có khả năng chuyển nhiễm lên các dòng tế bào không phân chia  Sự biểu hiện bắt đầu giảm đi sau một thời gian biểu hiện ổn định 14Chuyển gen sử dụng virus 15Chuyển gen không sử dụng virus Phương pháp hóa học  Calcium Phosphate  DEAE dextran  Liposome Phương pháp vật lí  Điện biến nạp  Súng bắn gen 16Chuyển gen không sử dụng virus Phương pháp hóa học  Sử dụng lần đầu tiên vào năm 1965 (DEAE- dextran)  Giúp cho DNA dễ dàng bám và di chuyển qua màng tế bào, màng nhân.  Hiệu quả thấp hơn so với các phương pháp chuyển gen sử dụng virus  Yêu cầu nghiêm ngặt về hóa chất sử dụng  Không liên quan đến các vấn đề về an toàn sinh học 17Chuyển gen không sử dụng virus Phương pháp Calcium Phosphate  Tạo tủa từ phức hợp DNA/CaCl2 và đệm HBS 2X (Hepes buffer saline)  Tủa có chứa DNA sẽ được gắn lên bề mặt tế bào quan tâm  DNA sẽ di chuyển vào bên trong tế bào thông qua cơ chế thực bào (endocytosis)  Tủa CaPO4: ngăn chặn sự ảnh hưởng của nuclease 18Chuyển gen không sử dụng virus Phương pháp Calcium Phosphate ...