Bài giảng nuôi cấy mô - tế bào thực vật bằng tế bào trần và kĩ thuật chuyển gen

Tham khảo tài liệu bài giảng nuôi cấy mô - tế bào thực vật bằng tế bào trần và kĩ thuật chuyển gen, tài liệu phổ thông, sinh học phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài giảng nuôi cấy mô - tế bào thực vật bằng tế bào trần và kĩ thuật chuyển gen Chủ đề: NUÔI CẤY MÔ – TẾ BÀOTHỰC VẬT BẰNG TẾ BÀO TRẦN VÀ KĨ THUẬT CHUYỂN GEN KHÁI NIỆMNuôicấymôtếbàothựcvậtlàkĩthuậtchophép nuôicấydễdàngnhữngtếbàothựcvậthaymô phânsinhsạchbệnhtrongmôitrườngnhântạo thíchhợpđểtạoranhữngkhốitếbàohaynhững câyhoànchỉnhtrongốngnghiệm. CƠ SỞ SINH LÍ CỦA CÔNG NGHỆ NUÔI CẤY MÔ- TẾ BÀO TÍNHTOÀNNĂNG:  Làkhảnăngcủa1tếbào hìnhthành1câyhòa chỉnhtrongđiềukiệnnuôi cấythíchhợp,dotrongtế bàocóchứabộ AND(NST)hoànchỉnh, chứatoànbộthôngtindi truyềncho1chukìsống hoànchỉnh. ANDmARN Protêintínhtrạng  Tùy từng tế bào, từng loại mô, từng thời kì sinh trưởng, phát triển mà các gen phù hợp hoạt động; các gen không cùng hoạt động như nhau trong các giai đoạn phát triển của cơ thể (do cơ chế điều hòa hoạt động của gen). SỰ PHÂN CHIA, PHÂN HÓA, PHẢN PHÂN HÓA CỦA TẾ BÀO: Phân hóa: 1 tế bào 1khối tế bào(phân hóa) mô cơ quan hệ cơ quan. Phản phân hóa: khi các tế bào đã phân hóa thành các mô chức năng riêng biệt nhưng vẫn có thể quay về trạng thái chức năng phôi sinh ban đầu ki gặp điều kiện thuận lợi.• Các đặc tính trên được xác định dựa trên cơ sở là đặc điểm di truyền nhưng sự thay đổi môi trường cũng có ảnh hưởng trực tiếp đến các đặc tính đó. CÁCNHÂNTỐĐẢMBỎTHÀNH CÔNGTRONGCÔNGNGHỆNUÔI CẤYMÔTẾBÀOTHỰCVẬT: Đảmbảođiềukiện vôtrùng,phòngthí nghiệmphảichuyên hóacao. Chọnđúngmôi trườngvàchuẩnbị môitrườngđúng cách. Chọnmôcấy,xửlí môcấythíchhợp trướcvàsaukhicấy. CÁC BƯỚC TRONG KĨ THẬY NUÔI CÁC CẤY MÔ- TẾ BÀO THỰC VẬT Tạo vật liệu khởi đầu: thường chọn chồi là bộ phận nuôi cấy thích hợp nhất khử cấy trong môi trường khởi động để trùng tái sinh Giai đoạn nhân nhanh: vật liệu khởi đầu được chuyển sang môi trường nhân nhanh có bổ sung Xitokinin để tái sinh 1 thành nhiều chồi. Giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh: tách riêng các tách chồi cho vào môi trường tạo rể (bố sung ch mỗi chồi ra rể thành 1 cây hoàn chỉnh. Auxin) Giai đoạn ra cây: cây trong ống nghiệm đủ tiêu chuẩn (chiều cao, số lá, số rể) sẽ được chuyển sang môi trường tự nhiên. CÁCHÌNHTHỨCNUÔI CẤYMÔ• Nuôicấymôthựcvật• Nuôicấymôbằngtếbào trần NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬTNUÔI  Nuôi cấy mô của cơ quan tách rời: VD: củ cà rốt cắt lát VD: tách mảnh mạch rây xử tách lí+ nuôi cấy mô phôi phôi nảy mầm cây non trong ống nghiệm cây trưởng thành Nuôicấytừmôhaycơ  quan: VD:từ1môlátáchtế bàonuôicấytrên đĩaPêtriđiềukiện thuậnlợisẽhình thànhnhữngcâynon trồngchậuphát triểncâytrưởng thành.  Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng: tr Từ 1 mô phân sinh của mô đỉnh sinh trưởng của rễ hoặc thân nuôi cấy trong môi trường dinh dưỡng sẽ tạo nên cây con Nuôi cấy mô sẹo từ hạt Nuôi phấn( Auxin rất quan trọng):Nuôi cấy bao phấn có hạtNuôi phấn chín môi trường thuận lợi bao phấn chín sẽ phân hóa bằng cách: nhân sinh sản sẽ tiêu biến nhân sinh dưỡng sẽ nguyên phân tạo mô sẹo nuôi dưỡng cây đơn bội(n) xử lí cônxixin cây trưởng thành(đơn bội kép). NUÔI CẤY MÔ BẰNG TẾ BÀO NUÔI TRẦN Khái niệm tế bào trần: Là tế bào thực vật bị Là loại bỏ vách bởi 1 xử lí enzim. Đó là tế bào tự do, cô lập, không định hướng( vì không còn chịu sự tương quan trong hệ thống thực vật).SỰ CÔ LẬP VÀ NUÔI CẤY TẾ BÀOTRẦN Sự cô lập: Trước hết phải xử lí vật liệu khởi đầu( lá, mô sẹo, dịch treo tế bào…) với enzim phân hủy vách( Xenlulaza, HemiXenlulaza, Pectolyaza…). Vídụ:phươngpháptạo tếbàotrầntừlá: Lálàmsạchlábằng Clorox10%rửalại lá3lầnbằngnướccất tiệttrùngtáchlớp biểubìdướicủalá+ gâyconguyênsinh 1hbằngMannitol 10%enzimthuđược tếbàotrần.  Sức trương tế bào bình thường thì được cân bằng với sức ép ...