Bài giảng Nuôi cấy tế bào động vật, kỹ thuật và ứng dụng: Bảo quản đông lạnh tế bào

"Bài giảng Nuôi cấy tế bào động vật - Kỹ thuật và ứng dụng: Bảo quản đông lạnh tế bào" trình bày khái niệm bảo quản đông lạnh; vai trò của bảo quản động lạnh; nguyên tắc trong bảo quản đông lạnh tế bào; quy trình bảo quản đông lạnh tế bào...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài giảng Nuôi cấy tế bào động vật, kỹ thuật và ứng dụng: Bảo quản đông lạnh tế bào TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TPHCM KHOA SINH HỌC – CÔNG NGHỆ SINH HỌC VIỆN TẾ BÀO GỐCNUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT: KĨ THUẬT VÀ ỨNG DỤNGBẢO QUẢN ĐÔNG LẠNH TẾ BÀO CRYOPRESERVATION Lê Thị Ngân Hà ltnha@hcmus.edu.vn TPHCM 03/2018…IwanttoliveandlivelongerandIthinkthatinthefuturetheymayfindacureformycancerandwakemeup,the14-year-oldwrotetoaBritishjudgebeforeherrecentdeath.Shesaidbeingcryopreservedgivesmeachancetobecuredandwokenup— eveninhundredsofyearstime.”…o Tái lưu thông máuo Thuốc hỗ trợ bảo vệ tế bàoo Thay máu và dịch lỏng trong cơ thể bằng chất chống đôngo Giảm nhiệt với tốc độ 0,5/giờ đến nhiệt độ nito lỏngo Bảo quản trong các tủ đông hình trụ. Lịch sửnow1987 Tạm dừng các bảo quản trứng.1970s Phát triển các nghiên cứu về đông lạnh tinh trùng người.1959 Lovelock,Bishop:DMSO– redbloodcell1953 Sherman:đông lạnh tinh trùng người – rã đông1949 Polge:glycerol– tinh trùng gà1866 Mantagazza:ngân hàng tinh trùng cho tinh trùng người đông lạnh1776 Spallanzani:tinh trùng người vẫn dichuyển khi gặp nhiệt độ thấp Bảo quản đông lạnh là gì?Bảo quản: là quy trình sinh học nhằm đảm bảo •nhổn định về mặt di truyền và cấu trúc nguyên vẹn của các tế bào sống; đảm bảo các thành phần nhưnucleic acid và protein của tế bào không thay đổi.Bảo quản lạnh là việc sử dụng nhiệt độ rất thấp để bảovệ tế bào và mô sống còn nguyên vẹn trong một thờigian dài Vì sao phải bảo quản đông lạnh tế bào? Ngân Thuận hàng tế lợi bảo bào tồn gen Giảm rủi roTiết kiệm nhiễmthời gian nguyên vật liệu Ngăn cản sự biệt hoá Thuận /lão lợi phân hoá loại,tạo dòng Thuận Dòng tế lợi vận bào quý chuyển hiếmĐáp ứng của tế bào với các stress khi đông lạnh Tác nhân stress Phản ứng của tế bào Giảm nhiệt độ Biến đổi lớp màng lipid,khử polymer hoá bộ xương tế bào Tăng nồng độ các chất hoà tan Giảm áp suất thẩm thấu Tăng nồng độ ion Phản ứng trực tiếp trên màng bào gồm tính tancủa màng protein Khử nước Mất ổn định lớp đôi phospholipid Kết tủa muối Không rõ Hình thành bọt khí Tổn thương cơ học lên màng và bộ xương tế bào Thay đổi pH Biến tính protein Tế bào bị chèn xếp khít lại Tổn thương màng Tính nhớt của môi trường tăng Quá trình khuếch tán/thẩm thấu bị hạn chế NGUYÊNTẮC Giảm thiểu sự hình thành tinh thể băng trong tế bào(1) Đông lạnh “chậm”(2) Sử dụng chất bảo quản đông lạnh(3) rữ các tế bào ở mức nhiệt độ thấp nhất có thể để giảm thiểu tác động của nồng độ muối cao lên sự biến đổi proteintrong TB.(4) tanbăng nhanh chóng để giảm thiểu sự phát triển của tinh thể băng (tái kết tinh) Nhiệt độ CPA Quy trìnhTốc độ làm lạnh Yếu tố ảnh hưởng đến TBTaeHoonJang,Cryopreservationanditsclinicalapplications,2017 CHẤT BẢO QUẢN ĐÔNG LẠNH – CRYOPROTECTANTS AGENT CPALà các loại hoá chất tan được trong nước, có khả năng xâm nhập vào bêntrong tế bào, được sử dụng với mục đích giúp tế bào ngăn ngừa các tổnthương tế bào do đông lạnh.Nguyên tắc:(1) Thay thế nước trong tế bào à giảm hình thành tinh thể đá nội bào à giảm tổn thương do tinh thể đá gây ra.(2) Hạn chế tăng nồng độ các chất hoà tan nội bào(3) Kết lên màng bào tương à bảo vệ tế bào.Hoạt động: “khử nước” trong quá trình đông lạnh, “bù nước” trong quátrình giải đôngVD: DMSO, glycerol, glycols, một vài amino acid (proline), … Non-permeating Perme ...