Bài giảng Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật

Bài giảng Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật của ThS. Phan Lữ Chính Nhân sau đây sẽ trang bị cho các bạn những kiến thức về hai kiểu nuôi cấy sơ cấp bao gồm nuôi cấy mảnh mô sơ cấp và nuôi cấy sơ cấp tế bào đơn, quy trình nuôi cấy mô sơ cấp.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài giảng Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vậtKỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật ThS. Phan Lữ Chính Nhân THU NHẬN MẪU MÔ CẮT NHỎ (chọn lọc mẫu mô quan tâm, cắt bỏ phần mô chết) Tách tế Cắt nhỏ Tách tế bào bào bằng(mảnh nhỏ bằng cơ học (nghiền, ép) enzym để nuôi) (ủ…)Nuôi mẫu NUÔI SƠ Trypsin Collagenas Trypsin ấmmô sơ cấp CẤP lạnh e Tái huyền Thu nhận Ly tâm Cấy chuyền phùtế bào mớiThu mảnh DÒNG TẾ mô thứ BÀO cấp Hai kiểu nuôi cấy sơ cấpKIỂU 1: NUÔI CẤY MẢNH KIỂU 2: NUÔI CẤY SƠ CẤP MÔ SƠ CẤP TẾ BÀO ĐƠNLà việc nuôi cấy các mảnh mô Là việc nuôi cấy các tế bào đơnin vitro. Trong quá trình nuôi được tách ra từ mảnh mô. Trongcấy, các tế bào từ mảnh mô sẽ quá trình nuôi, từng mỗi tế bàophát triển lan ra từ vùng mô sẽ phát triển tăng sinh thànhtrung tâm. nhiều tế bào mới.NUÔI CẤY MẢNH MÔ SƠ CẤP (mảnh mô ung thư vú)Thu nhận tế bào đơn nhân tủy xương chuộtNuôi cấy chọn lọc tế bào Tua (DC) từ tủy xương chuộtNUÔI CẤY SƠ CẤP HUYỀN PHÙ TẾ BÀO ĐƠN (thu từ máu cuống rốn) Quy trình nuôi cấy sơ cấp Thu nhận mẫu Xử lí mẫu Nuôi cấy tế bào đơn: Nuôi cấy mảnh mô:Tách mô thành tế bào đơn Cố định mảnh mô Nuôi cấy Thu nhận mẫu• Các mẫu thu nhận có thể bao gồm bất kì mô sống nào của cơ thể.• Trước hết phải làm sạch mô tại vị trí lấy mẫu bằng cồn, cho mô vào dung dịch PBS, nhanh chóng chuyển về phòng thí nghiệm.• Tùy loại mẫu mô cũng như thời gian cần thiết vận chuyển về phòng thí nghiệm: có kế hoạch vận chuyển chúng trong điều kiện thích hợp.Bảo quản mẫuBảo quản mẫu Xử lí mẫu đối với nuôi cấy huyền phù tế bào đơnCác tế bào động vật trong khối mô liên kết chặt chẽ với nhaunhờ các cầu nối hình thành giữa các tế bào với nhau.Biện pháp: – (1) tác dụng một lực cơ học để bẻ gãy những cầu nối. – (2) dùng enzym để phân hủy các cầu nối nói trên. Cắt nhuyễnBiện pháp cơ học Ép nhuyễn Tách bằng màng lọc Phương pháp cắt nhuyễnSử dụng lục sơ học bẻ gãy các cầu nối liênbào: dùng kéo, dao cắt nhuyễn các mảnh mô.Huyền phù vào dịch PBS, để lắng, thu dịchtrong Phương pháp ép nhuyễnÉp nhuyễn mô: dùng 2phiến lame ép chặt mảnhmô để thu tế bào đơn đối vớinhững mô có liên kết yếu. Phương pháp tách bằng màng lọcTách bằng màng lọctế bào (Cell strainer):kích thước lỗ trênmàng từ 70–100 µm,chỉ cho những tế bàođơn có kích thướctương ứng qua màng.Tách mô thành tế bào đơn bằng enzym • Quy trình trypsin ấm • Quy trình trypsin lạnhQuy trình trypsin ấm Quy trình trypsin lạnh Nếu các mảnh mô chưa Cắt mẫu mô [2 – Thêm môi trường, sục 3mm], rửa nhiều lần nhẹ nhành cho đến khi rời ra có thể thêm môi với PBS vô trùng mô rời ra trường để dễ huyền phù hoặc dùng màng lọc ủ ống chứa mẫu mô Thu dịch huyền phù Thay PBS bằng trong 36,50C, trypsin 0.25% tế bào, xác định mật 20 – 30 phút độ, tiến hành nuôiỦ trong 40C, 6- 18 giờ Loại bỏ trypsin ...