BIỆT HÓA IN VITRO CÁC TẾ BÀO MẦM TỪ MẢNH MÔ TINH HOÀN CHUỘT TÓM TẮT Mục

BIỆT HÓA IN VITRO CÁC TẾ BÀO MẦM TỪ MẢNH MÔ TINH HOÀN CHUỘTTÓM TẮT Mục tiêu: Xác định sự biệt hóa in vitro các tế bào mầm trong tinh hoàn thành các tế bào tinh trùng trưởng thành. Phương pháp: Các mẫu mô tinh hoàn chuột trưởng thành được thu nhận để phân lập các tế bào mầm. Các tế bào mầm và các tế bào đã biệt hóa như Sertoli được đồng nuôi cấy trong môi trường GAMETE-100 bổ sung với hormone FSH và testosteron. Các mẫu nuôi cấy được đánh giá sau 24 giờ và 48 giờ....
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
BIỆT HÓA IN VITRO CÁC TẾ BÀO MẦM TỪ MẢNH MÔ TINH HOÀN CHUỘT TÓM TẮT Mục BIỆT HÓA IN VITRO CÁC TẾ BÀO MẦM TỪ MẢNH MÔ TINH HOÀN CHUỘT TÓM TẮT Mục tiêu: Xác định sự biệt hóa in vitro các tế bào mầm trong tinhhoàn thành các tế bào tinh trùng trưởng thành. Phương pháp: Các mẫu mô tinh hoàn chuột trưởng thành được thunhận để phân lập các tế bào mầm. Các tế bào mầm và các tế bào đã biệt hóanhư Sertoli được đồng nuôi cấy trong môi trường GAMETE-100 bổ sungvới hormone FSH và testosteron. Các mẫu nuôi cấy được đánh giá sau 24giờ và 48 giờ. Sự trưởng thành của tế bào mầm được đánh giá thông qua sựhình thành đuôi (tiêm mao). Kết quả: Các tế bào mầm tồn tại trong tinh hoàn có thể thu nhận vànuôi cấy in vitro. Các số liệu thu được cho thấy với nồng độ FSH là 50IU/ml và testosteron là 1 µM/ml thì thích hợp cho việc nuôi cấy và biệt hóacác tế bào mầm thành tinh trùng. Kết luận: FSH có vai trò quan trọng lên sự trưởng thành của tế bàomầm, trong khi đó testosteron hầu như không có tác động đó. Tuy nhiên,việc kết hợp FSH và testosteron sẽ cho kết quả cao hơn khi chỉ sử dụng FSHhay testosteron. ABSTRACT IN VITRO GERM CELLS DIFFERENTIATION OF MOUSETESTICULAR TISSUES Pham Van Phuc, Truong Dinh, Huynh Thi Le Duyen, Phan Kim Ngoc * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 11 - No 4 - 2007: 219 - 223 Objective: To identify in vitro germ cells differentiation of mousetesticular tissues to mature sperms. Method: Testis tissues derived from mouse adult testis is used forisolation germ cells. Germ cells and some of different cells such as Sertoliare co-cultured in vitro in medium GAMETE-100, plus with FSH andTestosterone. After 24 and 48h of culture, progression of spermatogenesisand percentage of matured germ cells are evaluated. Maturation of germcells are evaluated via appearance of tails (flagella). Result: Germ cells of testicular tissues can be is olated and cultured invitro. Data showed that suitable FSH concentration is 50 IU/L andtestosterone is 1 µM/L. Conclusion: FSH has an important role in maturation of germ cells.In contrast with FSH, testosterone does not almost stimulate germ cellsmaturation. However, combination of FSH and testosterone can resulted inmaturation of germ cells better than if using only FSH or testosterone. ĐẶT VẤN ĐỀ Trong quá trình phát triển phôi, tế bào mầm hình thành và di cư vàocơ quan sinh dục. Khác với các cá thể cái, toàn bộ tế bào mầm đều đi vàoquá trình giảm phân và ngừng ở prophase II; trong khi đó các tế bào mầmcủa cá thể đực lại nguyên phân và đến tuổi dậy thì bắt đầu giảm phân. Dođó, trong cơ thể trưởng thành, ở tinh hoàn vẫn tồn tại một lượng lớn tế bàomầm sinh tinh(2). * Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐH Quốc Gia TP. HCM Trong một số trường hợp vô sinh ở người, sự ngừng phân chia của cáctế bào mầm trong cơ thể đực không được kích hoạt thích hợp cho tiếp tụcgiảm phân bình thường; hậu quả là không có tinh trùng trưởng thành hìnhthành. Các nghiên cứu gần đây cho thấy các tế bào mầm trong cơ thể trưởngthành của cá thể đực có thể tiếp tục quá trình giảm phân tạo tinh trùngtrưởng thành in vitro. Trong môi trường nuôi cấy, FSH và testosteron đượcchứng minh là có vai trò trong sự trưởng thành của tế bào mầm sinh tinh invitro(4,5). Với kĩ thuật này, người ta đang hi vọng vào một phương pháp điều trị vôsinh mới kết hợp với kĩ thuật ICSI (vi tiêm tinh trùng vào bào tương trứng).Theo phương pháp này: đầu tiên các mảnh sinh thiết tinh hoàn được thu nhận,sau đó chúng được nuôi cấy biệt hóa in vitro thành các tinh trùng trưởng thànhvà cuối cùng sử dụng kĩ thuật ICSI để vi tiêm nó vào trứng(3). Ngoài ý nghĩađiều trị vô sinh, việc nuôi cấy biệt hóa in vitro các tế bào mầm tinh hoàn thànhtinh trùng trưởng thành còn ý nghĩa lớn trong bảo tồn giống, bảo tồn nguồngen. Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng các mảnh biểu mô tinh hoàncủa chuột trưởng thành để thu nhận tế bào cho nuôi cấy. Đây xem như là mộtmô hình cho các nghiên cứu xa hơn. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Thu nhận tinh hoàn Chuột đực trưởng thành bị giết chết bằng kéo dãn khớp cổ. Giải phẫu,kéo tuột lớp da đến hết hai tinh hoàn. Thu nhận hai tinh hoàn, cho vào dungdịch PBSA. Thu nhận tế bào đơn Các mảnh mô tinh hoàn được đặt vào trong môi trường GAMETE-100(Vitrolife). Tiến hành ép các mảnh mô bằng hai miếng lame sạch. Các mảnhmô này được phân tách một phần bởi lực cơ học. Sau đó, chuyển toàn bộ cácmảnh mô sau khi ép vào dung dịch collagenase IV (1000 U/ml, Sigma), ủ ở370C, trong 15-30 phút. Huyền phù tế bào thu nhận được li tâm ở 2500vòng/phút trong 5 phút, thu cặn. Tái huyền phù cặn trong môi trườngGAMETE-100 đã được làm ấm ở 300C. Nuôi cấy và biệt hóa Nhiều công tr ...