ĐỊNH LƯỢNG ALPHA-FETOPROTEIN TRONG HUYẾT THANH NGƯỜI BẰNG HỆ THỐNG ĐỊNH

ĐỊNH LƯỢNG ALPHA-FETOPROTEIN TRONG HUYẾT THANH NGƯỜI BẰNG HỆ THỐNG ĐỊNH LƯỢNGTÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: So sánh kết quả định lượng alpha-fetoprotein trong huyết thanh người từ hệ thống định lượng sử dụng kháng thể đơn dòng kháng alpha-fetoprotein được sản xuất từ chuột LOU (AFP-L) với hệ thống định lượng của hãng Maxim Biotech và Abbott. Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu thực nghiệm. Kết quả: Kết quả định lượng nồng độ AFP trong các mẫu huyết thanh của hai hệ thống định lượng AFP-L và Maxim Biotech không có sự khác biệt với p = 0,533...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
ĐỊNH LƯỢNG ALPHA-FETOPROTEIN TRONG HUYẾT THANH NGƯỜI BẰNG HỆ THỐNG ĐỊNH ĐỊNH LƯỢNG ALPHA-FETOPROTEINTRONG HUYẾT THANH NGƯỜI BẰNG HỆ THỐNG ĐỊNH LƯỢNG TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: So sánh kết quả định lượng alpha-fetoproteintrong huyết thanh người từ hệ thống định lượng sử dụng kháng thể đơndòng kháng alpha -fetoprotein được sản xuất từ chuột LOU (AFP-L) với hệthống định lượng của hãng Maxim Biotech và Abbott. Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu thực nghiệm. Kết quả: Kết quả định lượng nồng độ AFP trong các mẫu huyếtthanh của hai hệ thống định lượng AFP-L và Maxim Biotech không có sựkhác biệt với p = 0,533 (>0,05), và hệ số tương quan nội lớp là: 0,94. Kếtquả định lượng nồng độ AFP trong các mẫu huyết thanh của hai hệ thốngđịnh lượng AFP-L và Abbott không có s ự khác biệt với p = 0,345 (>0,05),và hệ số tương quan nội lớp là: 0,97. Đối với mẫu huyết thanh của bệnhnhân u gan thì mức nồng độ trên 500 ng/ml ở cả 3 hệ thống là: 76%(19/25), mức từ 200 – 300 ng/ml: 16% (4/25), mức dưới 100 ng/ml: 8%(2/25) Kết luận: Hệ thống định lượng dựa trên kháng thể đơn dòng khángAFP của chuột LOU (AFP-L) tương đương với hệ thống định lượng củahãng Maxim Biotech và Abbott. ABSTRACT EVALUATE THE RESULT OF QUANTITATVEDETERMINATION OF ALPHA-FETOPROTEIN SERUM BY USING ANTI-ALPHA-FETOPROTEIN MONOCLONAL ANTIBODIES OF THE B LYMPHOCYTES OF LOU R AT ANDIR983 CELLS Phan Ngoc Tien * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 11 - No 2 - 2007:168 – 173 Purpose: Compare the result of quantitive determination of AFPserum by using anti-AFP monoclonal antibodies of the Lou rat (AFP-L)with that of Maxim Biotech and Abbott. Method: Experimental research. Results: The results of quantification of AFP in serum samples ofAFP-L and Maxim Biotech are similar with p = 0.533 (>0.05) and ICC(Intraclass Correlation Coefficient): 0.94; the results of quantification ofAFP in serum samples of AFP-L and Abbott are similar with p = 0.345(>0.05) and ICC (Intraclass Correlation Coefficient): 0.97. Theconcentrations of AFP of patients with hepatoma of three systems are >500 ng/ml (76%, 19/25), 200-300 ng/ml (16%, 4/25), dụng kháng thể đơn dòng kháng alpha-fetoprotein được sản xuất từ tế bàolymphô B của chuột LOU đã mẫn cảm với AFP và dòng tế bào IR983(7)chúng tôi tiến hành định lượng AFP và so sánh với hệ thống định lượng sửdụng phương pháp thử nghiệm miễn dịch men của hãng Maxim Biotech vàAbbott. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU So sánh kết quả định lượng alpha-fetoprotein trong huyết thanhngười từ hệ thống định lượng sử dụng kháng thể đơn dòng kháng alpha-fetoprotein được sản xuất từ chuột LOU với hệ thống định lượng của hãngMaxim Biotech và Abbott. ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu thực nghiệm. Đối tượng nghiên cứu Kháng thể đơn dòng kháng AFP và kháng thể đơn dòng kháng AFPcó gắn men peroxidase sản xuất từ chuột LOU. Tiêu chuẩn chọn mẫu huyết thanh Cỡ mẫu Chọn 90 mẫu huyết thanh, trong đó: + 55 mẫu huyết thanh bệnh lý của bệnh nhân đ ược khám và điều trịtại Trung Tâm Ung Bướu Tp. HCM. - 25 mẫu huyết thanh của nệnh nhân có siêu âm hoặc CT scan pháthiện u gan, tuổi trên 40 gồm 20 nam và 5 nữ. - 16 mẫu huyết thanh của bệnh nhân đ ược chẩn đoán viêm gan siêuvi B cấp, trong đó gồm 9 nam và 7 nữ, tuổi trên 18, HBsAg (+). - 14 mẫu huyết thanh của bệnh nhân đến khám tại phòng khám NgoạiChẩn TTUB Tp.HCM có HBsAg (+) nhưng không có biểu hiện lâm sàng, gồm10 nam – 4 nữ, tuổi trên 18. + 35 mẫu huyết thanh của người bình thường - Người khỏe mạnh. - HBsAg (-). Lưu trữ và bảo quản huyết thanh: Lấy khoảng 2ml máu, sau đó lấy huyết thanh và huyết thanh đượclưu trữ ở nhiệt độ –24oC cho đến khi sử dụng. Phương pháp thu thập số liệu - Định lượng nồng độ AFP trong các mẫu huyết thanh bằng hệ thốngđịnh lượng AFP của hãng MAXIM BIOTECH, và bằng hệ thống định lượngAFP của chuột LOU Trong phần này chúng tôi sử dụng xét nghiệm bằng kỹ thuật ELISAcủa Maxim Biotech (Mỹ)(9). - Nguyên tắc Hệ thống này dùng 1 kháng thể kháng AFP cố định trên pha rắn và 1kháng thể của chuột khác kháng AFP gắn men peroxidase (conjugate). - Chuẩn bị mẫu huyết thanh: Chuẩn bị 90 mẫu huyết thanh được đánh số thứ tự từ 1 đến 90, trongđó 35 mẫu huyết thanh của người bình thường được đánh số từ 1 đến 35,14 mẫu huyết thanh của bệnh nhân có HBsAg (+) đ ược đánh số từ số 36đến 49, 16 mẫu huyết thanh của bệnh nhân viêm gan siêu vi B cấp đượcđánh số từ 50 đến 65, 25 mẫu huyết thanh của bệnh nhân u gan đ ược đánhsố từ 66 đến 90. Lần 1 mẫu huyết thanh định lượng không pha loãng, lần 2những mẫu huyết thanh có nồng độ trên 350 ng/ml ở lần 1 sẽ được phaloãng với tỉ lệ 1:2. Những mẫu huyết thanh nào tiếp tục có nồng độ trên350ng/ml thì chúng tôi quyết định lấy kết quả cuối cùng là trên 500 ng/ml. - Tiến hành định lượng nồng độ AFP trong các mẫu huyết thanh bằnghệ thống của hãng Maxim Biotech(9) với phương pháp ELISA. Định lượng AFP trong huyết thanh bằng hệ thống định lượngcủa hãng Abbott(5): - Nguyên tắc: Axsym hệ thống dựa trên kỹ thuật thử nghiệm miễn dịch men vi hạt(MEIA: Microparticle Enzyme Immuno Assay). - Quá trình phản ứng xảy ra theo trình tự sau: Mẫu thử, chất pha loãng và vi hạt được gắn kháng thể kháng AFPđược phân phối vào một giếng của buồng phản ứng. Trong khi ủ, AFP củamẫu thử sẽ gắn vào kháng thể kháng AFP được gắn trên vi hạt tạo thànhphức hợp kháng nguyên – kháng thể. Một phần hỗn hợp phản ứng được chuyển vào buồng ma trận. Vi hạtsẽ gắn không đảo ngược được vào ma trận sợi ...