Định típ phức hợp kháng nguyên bạch cầu người (HLA: Human Leukocyte Antigen) Locus B bằng phương pháp giải trình tự gen kết hợp với tạo dòng

Phức hợp kháng nguyên bạch cầu người (HLA: human leukocyte antigen) là phức hợp các protein màng tế bào đóng vai trò quan trọng trong điều hòa miễn dịch. Định típ HLA rất cần thiết cho việc ghép tạng cũng như ghép tế bào gốc. Giải trình tự Sanger là một công cụ giúp định típ HLA chính xác, độ phân giải cao và đang được thực hiện trên toàn thế giới.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Định típ phức hợp kháng nguyên bạch cầu người (HLA: Human Leukocyte Antigen) Locus B bằng phương pháp giải trình tự gen kết hợp với tạo dòngY Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 4 * 2019 Nghiên cứu Y học ĐỊNH TÍP PHỨC HỢP KHÁNG NGUYÊN BẠCH CẦU NGƯỜI (HLA: HUMAN LEUKOCYTE ANTIGEN) LOCUS BBẰNG PHƯƠNG PHÁP GIẢI TRÌNH TỰ GEN KẾT HỢP VỚI TẠO DÒNG Mai Phương Thảo*, Lê Gia Hoàng Linh**, Nguyễn Thế Vinh**, Hoàng Anh Vũ**, Đỗ Đức Minh**TÓM TẮT Mục tiêu: Phức hợp kháng nguyên bạch cầu người (HLA: human leukocyte antigen) là phức hợp cácprotein màng tế bào đóng vai trò quan trọng trong điều hòa miễn dịch. Định típ HLA rất cần thiết cho việc ghéptạng cũng như ghép tế bào gốc. Giải trình tự Sanger là một công cụ giúp định típ HLA chính xác, độ phân giảicao và đang được thực hiện trên toàn thế giới. Đối tượng và phương pháp: Có 20 đối tượng tình nguyện tham gia nghiên cứu được định típ HLA locusB bằng phương pháp giải trình tự Sanger kết hợp với tạo dòng. Kết quả: Chúng tôi phát hiện 3 trường hợp mang alen HLA-B đồng hợp tử và 17 trường hợp dị hợp tử. Cácalen HLA-B được xác định bao gồm 07:02, 07:05, 13:01, 15:01, 15:02, 15:12, 15:25, 15:27, 15:35, 18:02, 27:06,35:05, 38:02, 40:01, 44:03, 46:01, 55:02, 56:01, 57:01, 58:01. Kết luận: Kỹ thuật giải trình tự Sanger là một kỹ thuật định típ HLA chính xác và tiết kiệm chi phí. Từ khóa: phức hợp kháng nguyên bạch cầu người (HLA), giải trình tự thế hệ mới, phản ứng PCR, giảitrình tự Sanger, tạo dòngABSTRACT HUMAN LEUKOCYTE ANTIGEN LOCUS B (HLA-B) TYPING BY SANGER SEQUENCING AND CLONING Mai Phuong Thao, Le Gia Hoang Linh, Nguyen The Vinh, Hoang Anh Vu, Do Duc Minh * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 – No. 4 - 2019: 219 – 225 Objectives: Human leukocyte antigen, a cell-surface protein complex, is responsible for the regulation of theimmune system. HLA typing is neccesary step in stem cell and organ transplantation. Sanger sequencing is anaccurate tool that can provide high resolution typing and has been applied worldwide. Methods: HLA-B 20 objects participated in the study were sequenced and cloned if nessesary. Results: HLA-B was found homozygous in 3 cases and heterozygous in 17 cases. Identified alleles were07:02, 07:05, 13:01, 15:01, 15:02, 15:12, 15:25, 15:27, 15:35, 18:02, 27:06, 35:05, 38:02, 40:01, 44:03, 46:01,55:02, 56:01, 57:01, 58:01. Conclusion: HLA typing by Sanger sequencing and cloning is accurate and cost-saving. Keywords: human leukocyte antigen (HLA), next generation sequencing (NGS), polymerase chain reaction(PCR), sanger sequencing, cloningĐẶT VẤN ĐỀ hệ thống các protein trên bề mặt hầu hết các tế bào trong cơ thể, được mã hóa từ locus các gen Hệ thống phức hợp kháng nguyên bạch nằm trên nhánh ngắn nhiễm sắc thể số 6,cầu người (HLA: Human leukocyte antigen) là chúng đóng vai trò quan trọng trong đáp ứng*Bộ môn Sinh lý-Sinh lý bệnh-Miễn dịch – Khoa Y – ĐH Y Dược TP. Hồ Chí Minh**Trung tâm Y sinh học phân tử - ĐH Y Dược TP. Hồ Chí MinhTác giả liên lạc: TS.BS. Đỗ Đức Minh ĐT: 0932999989 Email: ducminh@ump.edu.vnHội Nghị Khoa Học Nhi Khoa BV. Nhi Đồng 1 219Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 4 * 2019miễn dịch, giúp hệ thống miễn dịch trong cơ hiếm, mới.thể phân biệt được các tế bào trong cơ thể và Ngày càng có nhiều các alen HLA mới đượccác tế bào ngoại lai để từ đó có thể tấn công các phát hiện, do đó các bộ kit này cần được cậptế bào lạ xâm nhập(4). nhật liên tục. Các gen mã hóa cho hệ thống HLA được Trong khi đó, trên thế giới, việc định típchia thành 3 lớp chính, trong đó chủ yếu là lớp I HLA dựa chủ yếu vào phương pháp xác định(HLA-A, HLA-B và HLA-C) và lớp II (HLA- trình tự nucleotid bằng phương pháp SangerDRB1 và HLA-DQB1) tham gia vào quá trìnhtương tác giữa mảnh ghép và kí chủ. Trên mỗi hoặc giải trình tự thế hệ mới (SBT: sequence-phân tử HLA đều có vùng nhận diện, cấu trúc based typing) với độ phân giải có thể chấp nhậnprotein của vùng nhận diện này thường khác trên lâm sàng là 4 chữ số, đây được xem làbiệt giữa các cá thể và đây là cơ sở để định típ phương pháp chính xác và đáng tin cậy nhấtHLA. Vùng nhận diện này được mã hóa từ exon hiện nay và là tiêu chuẩn vàng trong việc xác2, 3 của các gen HLA ...