Đột biến gen COL1A1 trên bệnh nhân tạo xương bất toàn

Nội dung bài viết với mục tiêu xác định đột biến gen COL1A1 ở bệnh nhân và bố mẹ bệnh nhân tạo xương bất toàn. Nghiên cứu tiến hành 07 bệnh nhân tạo xương bất toàn và bố mẹ bệnh nhân được lựa chọn nghiên cứu, kỹ thuật giải trình tự gen trực tiếp được sử dụng để phát hiện đột biến.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Đột biến gen COL1A1 trên bệnh nhân tạo xương bất toànNghiên cứu Y họcY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 1 * 2013ĐỘT BIẾN GEN COL1A1 TRÊN BỆNH NHÂN TẠO XƯƠNG BẤT TOÀNBùi Thị Hồng Châu*, Trần Vân Khánh*, Hồ Cẩm Tú*, Trần Huy Thịnh * Tạ Thành Văn*TÓMTẮTMở đầu: Tạo xương bất toàn là bệnh di truyền trội trên nhiễm sắc thể thường, 85% gây nên do đột biến gentổng hợp collagen týp 1 (COL1A1). Bố hoặc mẹ mắc bệnh có khả năng truyền bệnh cho con 50%.Mục tiêu: Xác định đột biến gen COL1A1 ở bệnh nhân và bố mẹ bệnh nhân tạo xương bất toàn.Đối tượng phương pháp nghiên cứu: 07 bệnh nhân tạo xương bất toàn và bố mẹ bệnh nhân được lựa chọnnghiên cứu. Kỹ thuật giải trình tự gen trực tiếp được sử dụng để phát hiện đột biến.Kết quả: 5/7 bệnh nhân tạo xương bất toàn được phát hiện là có đột biến gen COL1A1, trong đó 2 trườnghợp là di truyền từ bố và 2 trường hợp là di truyền từ mẹ, 1 trường hợp là đột biến mới phát sinh.Kết luận: Phát hiện đột biến gen trên bố, mẹ bệnh nhân đóng vai trò quan trọng trong công tác tư vấn ditruyềnTừ khóa: Bệnh tạo xương bất toàn, COL1A1, đột biếnABSTRACTMUTATIONAL SPECTRUM OF COL1A1 GENE IN PATIENTS WITH OSTEOGENESISIMPERFECTABui Thi Hong Chau, Tran Van Khanh, Ho Cam Tu, Tran Huy Thinh, Ta Thanh Van* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 - No 1 - 2013: 20 - 24Background: Osteogenesis imperfecta, an autosomal dominant disease, is caused by mutation on gene codedfor collagen type 1 (COL1A1). Parent with this genetic disease deliver 50% of the ability of osteogenesisimperfecta for their children.Objective: Identification of COL1A1 gene mutation in OI patients and their parent.Method: 7 osteogenesis imperfecta patients and their parents were selected for this study. Direct sequencingwas used to detect the mutation.Results: The results showed that 5/7 patients were found to have the mutation in COL1A1 gene; includingtwo cases are inherited from the father and the two cases are inherited from the mother, one case was found as denovo mutation.Conclusion: Identify the mutations in COL1A1 gene is important for genetic counseling.Keywords: Osteogenesis imperfecta, COL1A1, mutationngười mẹ bị bệnh, nguy cơ sinh con bị bệnh làMỞĐẦU50% và không bị bệnh là 50%. Chẩn đoán bệnhTạo xương bất toàn (Osteogenesis ImferfectaOI không phức tạp ở những trường hợp có tiền– OI) là bệnh di truyền trội trên nhiễm sắc thểsử gia đình rõ hoặc biểu hiện bệnh nặng, có tiềnthường, chủ yếu do đột biến gen tổng hợpsử gãy xương. Với những trường hợp không cócollagen týp 1 (COL1A1). Nguy cơ mắc bệnh ởtiền sử gia đình hoặc gãy xương không có kếtnam và nữ là như nhau. Khi người bố hoặchợp với những bất thường ngoài xương thì chẩn* Trung tâm Nghiên cứu Gen-Protein, Trường Đại học Y Hà NộiTác giả liên lạc: TS. Trần Vân Khánh ĐT: 0915958661Email: vankhanh73md@yahoo.com20Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 1 * 2013đoán tương đối khó khăn, ngoài những tiêuchuẩn chẩn đoán về mặt lâm sàng, cần kết hợpthêm với xét nghiệm số lượng và cấu trúc phântử collagen týp 1 qua nuôi cấy nguyên bào sợi từda bệnh nhân và kết hợp phân tích gen(9,2).Kết quả phân tích gen là tiền đề quan trọnggiúp chẩn đoán trước sinh đối với các đối tượngcó nguy cơ cao sinh con bị bệnh để đưa ra nhữngtư vấn di truyền giúp ngăn ngừa và giảm tỉ lệmắc bệnh(6, 3). Nghiên cứu này được thực hiện tạiTrung Tâm nghiên cứu Gen - Protein, TrườngĐại học Y Hà Nội với mục đích xác định đột biếngen COL1A1 ở bệnh nhân và bố mẹ bệnh nhântạo xương bất toàn.Nghiên cứu Y họcABI-PRISM. Trình tự gen được đối chiếu và sosánh với trình tự trên GenBank (National centerfor biotechnology information, NCBI) để pháthiện đột biến.KẾTQUẢKết quả PCRSau khi thu được DNA có nồng độ và độtinh sạch cao, kỹ thuật PCR được tiến hành đểkhuyếch đại gen COL1A1.PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨUĐối tượng nghiên cứu- 07 bệnh nhân được chẩn đoán bệnh OI tạiKhoa Nội tiết- Chuyển hóa - Di truyền, Bệnhviện Nhi Trung ương dựa vào triệu chứng lâmsàng và cận lâm sàng điển hình.- Các cặp bố mẹ của các bệnh nhân trên.Phương pháp nghiên cứuLấy mẫu bệnh phẩmBệnh nhân được lấy 2ml máu tĩnh mạchchống đông trong EDTA, đảm bảo vô trùng.Tách chiết DNADNA tổng số được tách chiết từ máu toànphần chống đông EDTA bằng dung dịchphenol: chloroform: isopropanol (25:24:1).Nồng độ và độ tinh sạch DNA được đo trênmáy Nanodrop 1000.Kỹ thuật PCRNhững mẫu DNA đạt giá trị OD 280/260 ≥1,8 được sử dụng để khuếch đại với các cặpmồi đặc hiệu. Chu kỳ nhiệt: 94oC/5phút (94oC/1phút - 59oC/1phút - 72oC/ 2phút) x 35chu kỳ - 72oC/5phút. Sản phẩm PCR được bảoquản ở 4oC.Giải trình tự genSản phẩm PCR tiến hành giải trình tự trênmáy 3100-Avant Genetic Analyzer của hãngHình 1: Hình ảnh PCR đoạn gen được khuyếch đại từexon 39 - 41 của gen COL1A1. C mẫu đối chứng, 1-7mẫu bệnh nhân. MK: Marker 100 bpSản phẩm PCR được tiến hành giải trình tựgen trực tiếp để xác định đột biến, kết quả chothấy 5/7 bệnh nhân được phát hiện có đột biế ...