Giáo trình DNA tái tổ hợp part 3

- Hoạt tính exonuclease 3’ 5’. E. coli cắt các chuỗi nucleotide ở các đầu tự do của DNA, xúc tác cho sự thoái biến bậc thang từ đầu 3’ của cả DNA sợi đôi và sợi đơn khi không có dNTPs. Trong trường hợp có dNTPs, hoạt tính exonuclease trên sợi đôi sẽ bị ức chế bởi hoạt tính polymerase. Trong quá trình tổng hợp DNA, hoạt tính exonuclease thực hiện chức năng đọc sửa (proofreading) bằng cách cắt bỏ những nucleotide lắp ráp sai. nuclease 5’ 3’. E. coli . ...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Giáo trình DNA tái tổ hợp part 3 - Hoạt tính exonuclease 3’ 5’. E. coli cắt các chuỗi nucleotide ở các đầu tự do của DNA, xúc tác cho sự thoái biến bậc thang từ đầu 3’ của cả DNA sợi đôi và sợi đơn khi không có dNTPs. Trong trường hợp có dNTPs, hoạt tính exonuclease trên sợi đôi sẽ bị ức chế bởi hoạt tính polymerase. Trong quá trình tổng hợp DNA, hoạt tính exonuclease thực hiện chức năng đọc sửa (proofreading) bằng cách cắt bỏ những nucleotide lắp ráp sai. nuclease 5’ 3’. - E. coli . Cơ chất 5’ 3’ DNA enzyme DNA DNA polymerase DNAOH + ndNTP DNA-(pdN)n + nPPi Mg2+ mang nhóm 3’-OH 3’ 5’ DNA sợi đơn hoặc sợi enzyme đôi có đầu 3’-OH 5’ Exonuclease dsDNA ho pNOH Mg2+ 5’ 3’ hoặc thể enzyme lai RNA:DNA 5’ + 5’pN(pN)npNOH + ssDNA Exonuclease dsDNA pNOH Mg2+ - làm mẫu dò . . . 1. E. coli 3’ 5’ Công nghệ DNA tái tổ hợp 9 ). C 5’ 3’ DNA enzyme đơn/ DNA polymerase DNAOH + ndNTP DNA-(pdN)n + nPPi 2+ Mg nhóm 3’-OH tự do 3’ 5’ DNA sợi đơn hoặc sợi enzyme đôi thoái biến từ đầu 5’ Exonuclease pNOH 2+ 3’-OH tự do. Mg exonuclease trên DNA sợi đôi polymerase 5’ 3’ - Ứng dụng chính + Làm đầy đầu khuyết 3’ do enzyme hạn chế tạo ra. [- 32 P]dNTPs để làm đầy đầu khuyết 3’. 3’. Đầu tiên, hoạt tính exonuclease 3’ 5’ loại bỏ đầu lồi 3’ để tạo ra đầu khuyết 3’. Sau đó, nhờ sự có mặt ở nồng độ cao của một tiền chất được đánh dấu đồng vị phóng xạ, sự thoái biến bậc thang được cân bằng do sự hợp nhất của các dNTP ở đầu 3’. . + Tổng hợp DNA sợi đôi từ các khuôn mẫu sợi đơn trong phát sinh đột biến in vitro. 1. 4 (T4-infected E. coli) E. coli. nh polymerase Công nghệ DNA tái tổ hợp ...