Giáo trình DNA tái tổ hợp part 6

Hình 4.10. Phân tử DNA của phage . A: Tự tái bản DNA từ dạng vòng của làm cho nó trở thành dạng dây thẳng, hình thành các đoạn chồng lấp lên nhau, với độ dài khoảng 50 kb. B: Mỗi đầu đều chứa đầy 50 kb đơn vị của DNA, trước khi đuôi được tổng hợp gắn vào sau.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Giáo trình DNA tái tổ hợp part 6 A B λ DNA DNA Đuôi Đầu cosHình 4.10. Phân tử DNA của phage . A: Tự tái bản DNA từ dạng vòng củalàm cho nó trở thành dạng dây thẳng, hình thành các đoạn chồng lấp lên nhau, vớiđộ dài khoảng 50 kb. B: Mỗi đầu đều chứa đầy 50 kb đơn vị của DNA, trước khiđuôi được tổng hợp gắn vào sau. Spi+trong E. coli (red gam -Spi chi (chirecA). L47.1, red gam - Spi 2 recA+ E. coli . loại bỏ. gam recA+. Phage - red gamphenotype Spi+ recA-.Công nghệ DNA tái tổ hợp 882.2. Những vector được cải tiến Những vector thường được cải tiến nhằm mục đích: - Tăng khả năng thích ứng của các đoạn DNA ngoại lai khác nhau vớicác RE. - Cho phép chọn lựa phương thức tái tổ hợp mong muốn. - Cho phép có được các RNA probe sẵn sàng cho việc chuyển mã củaDNA ngoại lai gắn vào vector. Điều này giúp chúng ta dễ dàng sàng lọc cácthư viện trong quá trình chromosome walking, ví dụ như ZAP. - Phát triển các vector trong quá trình gắn vào cDNA của sinh vật bậccao, dưới hình thức một polypeptide dung hợp với β-galactosidase. Hìnhthức này rất hữu ích trong việc chọn lọc kháng thể, ví dụ như vector gt11. BamHI BamHI EcoRI EcoRI EMBL3 SalI SalI Vùng đệm (14 kb) Nhánh phải (9 kb) Nhánh trái (20 kb) BamHI BamHI EcoRI EcoRI SalI SalI EMBL4 Vùng đệm (14 kb) Nhánh phải (9 kb) Nhánh trái (20 kb) 5’…GGATC TGGGT CGACG GATCC GGGGA ATTCC CAGAT CC…3’ SalI BamHI EcoRIHình 4.11. Vector EMBL3 và EMBL4 được thiết kế từ phage mang các vị trínhận biết cho các enzyme SalI, BamHI và EcoRI Thế hệ gần đây nhất của vector là EMBL3 và EMBL4 (Hình 4.11),chúng mang các trình tự có tính chất polylinker nằm gần đoạn có thể thaythế được. Các phage với những thể insert đính bên trong nó có thể đượcchọn lọc bằng kiểu hình Spi -, chính là chi+. Thể cải tiến từ EMBL3 cóCông nghệ DNA tái tổ hợp 89những đột biến EMBL3 Sam, EMBL3 Aam Sam. Những đột biến trongvector không chỉ làm gia tăng khả năng chứa của nó, mà còn được sử dụngtrong hệ thống chọn lọc những trình tự DNA được phân lập, liên kết với cácgen ức chế (suppressor).III. Cosmid vector1. Đặc điểm của cosmid + đầu cos vector : - Các ori . - cos . i khoảng - . BamHI (44) BamHI (36) SmaI (42) ...