Giáo trình DNZ tái tổ hợp part 9

6.8. . Đoạn Klenow tạo đầu bằng cho cDNA sợi đôi và enzyme nuclease S1 cắt vòng cặp tóc. Các linker thứ nhất và thứ hai được gắn tuần tự vào hai đầu của cDNA, sau đó đoạn cDNA này sẽ được cắt cùng enzyme hạn chế với vector tạo dòng có vị trí nhận biết trên hai linker nhân tạo. Cuối cùng, đoạn cDNA có hai đầu tương đồng được gắn với vector và biến nạp vào E. coli.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Giáo trình DNZ tái tổ hợp part 9 cDNA sợi đôi Sửa chữa bằng cách xử lý với đoạn Klenow Bổ sung linker thứ nhất Cắt bằng nuclease S1 Sửa chữa bằng cách xử lý với đoạn Klenow hoặc bằng DNA polymerase của bacteriophage T4 Bổ sung linker thứ hai Cắt bằng enzyme hạn chế Gắn với plasmid vector Biến nạp vào tế bào khả biến E. coli 6.8. .Đoạn Klenow tạo đầu bằng cho cDNA sợi đôi và enzyme nuclease S1 cắt vòng cặptóc. Các linker thứ nhất và thứ hai được gắn tuần tự vào hai đầu của cDNA, sau đóđoạn cDNA này sẽ được cắt cùng enzyme hạn chế với vector tạo dòng có vị trínhận biết trên hai linker nhân tạo. Cuối cùng, đoạn cDNA có hai đầu tương đồngđược gắn với vector và biến nạp vào E. coli.Công nghệ DNA tái tổ hợp 142 Cấu trúc chóp 5’ (A) mRNA An AA AAAAAAAAAA A A Tổng hợp cDNA sợi thứ nhất bằng primer-adapter sợi đơn TTTTTTTTTTT T T TT cDNA sợi thứ nhất CA GC TG AG G Thủy phân RNA và bổ sung đuôi đồng trùng hợp CCCCCCCCCC (T)nCAGCTGAGG vào đầu 3’ của sợi cDNA 3’ 5’ thứ nhất bằng cách dùng terminal transferase Tổng hợp cDNA 3’ 5’ sợi thứ hai bằng (A)nGTCGACTCC GGAGTCGACGGGGGGGGGG primer-adapter sợi đơn.Tạo ra CCTCAGCTGCCCCCCCCCCC (T)nCAGCTGAGG nhiều vị trí cắt 3’ 5’ hạn chế ở đầu tận cùng cDNA SalI SalI 3’ 5’ (A)nGTCGACTCC GGAGTCGACGGGGGGGGGG CCTCAGCTGCCCCCCCCCCC (T)nCAGCTGAGG 3’ 5’ SalI SalI Cắt sợi cDNA bằng pTCGAC(G)n (A)nG RE thích hợp và gắn G(C)n (T)nCAGCTp nó vào vector 6.9 -adapter tổng hợp theo phương pháp trên khi gắn lacZđư . vector vector biểu hiện của bacteriophage gt11. VectorCông nghệ DNA tái tổ hợp 143 chỉ , trong khi vector .1.1. Vector gt10 cI2 như cbacteriophage E.coli Eco cDNA ...