Giáo trình thực tập vi sinh vật chuyên ngành part 6

Tham khảo tài liệu giáo trình thực tập vi sinh vật chuyên ngành part 6, khoa học tự nhiên, nông - lâm phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Giáo trình thực tập vi sinh vật chuyên ngành part 6 violet gentian khu n l c v n không b nhu m màu. Vi khu n gram âm, không bào t , di ñ ng nh tiên mao. 3. Xác ñ nh kh năng c ñ nh nitơ 3. 1. Thí nghi m tr ng cây trong ng th ch: Phương pháp này cho phép nh n bi t có kh năng c ñ nh nitơ c a vi khu n n t r . Môi trư ng dùng ñ tr ng cây gây nhi m: Môi trư ng Jenhsen (1942) ho c môi trư ng Thornton (1930) Môi trư ng Jenhsen Môi trư ng Thornton CaHPO4 1,0g CaHPO4 2,0g K2HPO4 0,2g K2HPO4 0,5g MgSO4.7H2O 0,2g MgSO4.7H2O 0,2g FeCl3 0,1g NaCl 0,1g Nư c 1000ml Nư c 1000ml Th ch 8 - 15g Th ch 8 - 15g pH = 6,5 - 7,0 pH = 6,5 - 7,0 Có th dùng ng môi trư ng th ch nghiêng ho c ñ ng. Dùng dung d ch dinh dư ng Gibson (1963) 1ml/lit môi trư ng. Thành ph n dung d ch vi lư ng nh sau: H3PO3 0,05g; (NH4)2MoO4 0,05g KCl 0,005g NaBr 0,005g ZnSO4 0,003g Al(SO4).18H2O 0,003g MnSO4 0,002g Nư c c t 1000ml Chu n b ng môi trư ng: ng nghi m 150 x 20mm cho h t ñ u nh ng nghi m 200 x 30mm cho h t ñ u l n Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Giáo trình th c t p vi sinh v t chuyên ngành ……………49 Lư ng môi trư ng cho vào theo b ng sau: C ng nghi m Th ch ñ ng Th ch nghiêng (mm) (ml) (ml) 150 x 20 8 12 150 x 25 12 18 150 x 30 18 30 200 x 30 25 40 Cho môi trư ng tr ng cây theo b ng hư ng d n trên. Nút bông và kh trùng 1at trong 20 phút. Sau ñó ñ t nghiêng n u c n tr ng cây trên ng th ch nghiêng. Chu n b h t gi ng: Ch n h t gi ng s ch không b t n thương. Kh trùng b ng etanol 95%. Ngâm trong 3 phút ho c 0,2% HgCl2 ñư c axit hóa (50ml/lít HCl). H t ñư c kh trùng ph i ñư c r a s ch b ng nư c vô trùng ít nh t là 5 l n. Sau ñem cho n y m m ( trên gi y l c m vô trùng ho c trên môi trư ng th ch ñĩa ho c trên cát vô trùng). Nhi m khu n: Nh ng h t ñã n y m m ñư c ñưa ra m t ñĩa vô trùng. Cho d ch vi khu n vào. H t ñư c nhi m khu n có th tr ng ngay vào ng th ch vô trùng ho c ñ sau 7 ngày r i m i tr ng (t t hơn là ñ sau 7 ngày) vào ng nghi m. 3. 2. Gieo tr ng cây vào ng nghi m Nh ng ng nghi m ñã ñư c kh trùng ñem ñ t lên giá s t, thay cho nút bông ñ u ng nghi m môi trư ng b ng b c gi y ñen, gi y thi c ho c t t hơn là b ng nút g m m có l khoan d c theo chi u dài c a nút g . Công vi c này ph i ti n hành trong ñi u ki n vô trùng. ð c m t l trên gi y b c mi ng ng nghi m. Cho h t ñ u n y m m ñã ñư c nhi m khu n c y vào ng nghi m qua l th ng. Có th tr ng 2 h t, nhưng v sau ch ñ 1 cây. Cây m m lúc ñ u m c phía trên ñ nh ng th ch ñ ng ho c th ch nghiêng. V sau ñ y vào v trí ng th ch ñ ng, n m trên b m t môi trư ng. N u là ng th ch nghiêng, thì ñ y cây n m kho ng 1/3 m t th ch v phía ñ u ng nghi m. ng th ch ñ ng, r cây s phát tri n trên b m t th ch, còn ng th ch nghiêng r s phát tri n d c theo m t th ch. Tr ng cây xong ñ vào giá s t trong phòng có chi u sáng thích h p. Có th chi u sáng t trên xu ng ho c t 2 bên vào. 3.3. ði u ki n + Chi u sáng: Tuỳ t ng gi ng ñ u khác nhau, tu i c a cây khác nhau, m c ñ phát tri n khác nhau, mà c n cư ng ñ chi u sáng khác nhau ( có th dùng bóng ñèn nê- ông 60w) + Nhi t ñ và ñ m: Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Giáo trình th c t p vi sinh v t chuyên ngành ……………50 Nhi t ñ t 20 - 300C, ñ m t t nh t là 60 - 70%. + Chăm sóc: Thư ng xuyên quan sát s khác nhau gi a ng ñ i ch ng và ng ñư c nhi m khu n. N u b sung ñ m ñ nuôi cây v i n ng ñ 70ppm (0,05% KNO3), thì có th cho vào môi trư ng th ch trong ng nghi m trư c khi gieo h t ho c vào lúc cây ñã m c. T t nh t là bón khi cây tr ng ñ c 5 - 7 ngày. N u quan sát th y cây x u, không ñ xanh (c ñ i ch ng l n nhi m khu n) thì ph i b xung thêm ñ m ngay, nhưng lư ng bón không ñư c cao hơn 0,07% KNO3, n u cao hơn có th b ñ c cho cây và vi khu n. 3.4. ðánh giá k t qu ng nghi m nhi m Rhizobium s t o ñư c n t s n r cây, sau tr ng 3 - 6 tu n, còn công th c ñ i ch ng s không t o n t s n. ðánh giá m i liên quan gi a th i gian và s phát tri n c a cây theo công th c sau: log W2 - logW1 Rw = t2 - t1 Rw = m i liên quan gi a s phát tri n và th i g ...