HỆ THỐNG ĐỊNH LƯỢNG ALPHA-FETOPROTEIN TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng

HỆ THỐNG ĐỊNH LƯỢNG ALPHA-FETOPROTEINTÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng hệ thống định lượng alphafetoprotein trong huyết thanh từ kháng thể đơn dòng kháng alpha-fetoprotein (AFP). Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu thực nghiệm. Kết quả: Hệ thống định lượng Alpha-fetoprotein bằng kỹ thuật ELISA sử dụng kháng thể đơn dòng kháng AFP, được sản xuất từ tế bào lymphô B của chuột LOU đã mẫn cảm với AFP và dòng tế bào IR983F, có thể định lượng nồng độ AFP trong huyết thanh từ 0,5ng/ml. Nghiên cứu định lượng AFP trong 90 mẫu huyết thanh, trong đó...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
HỆ THỐNG ĐỊNH LƯỢNG ALPHA-FETOPROTEIN TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng HỆ THỐNG ĐỊNH LƯỢNG ALPHA-FETOPROTEIN TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng hệ thống định lượng alpha-fetoprotein trong huyết thanh từ kháng thể đơn dòng kháng alpha-fetoprotein(AFP). Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu thực nghiệm. Kết quả: Hệ thống định lượng Alpha-fetoprotein bằng kỹ thuậtELISA sử dụng kháng thể đơn dòng kháng AFP, được sản xuất từ tế bàolymphô B của chuột LOU đã mẫn cảm với AFP và dòng tế bào IR983F, cóthể định lượng nồng độ AFP trong huyết thanh từ 0,5ng/ml. Nghiên cứu địnhlượng AFP trong 90 mẫu huyết thanh, trong đó 35 mẫu huyết thanh củangười bình thường, 14 mẫu huyết thanh của bệnh nhân có HBsAg (+), 16mẫu huyết thanh của bệnh nhân viêm gan siêu vi B cấp, 25 mẫu huyết thanhcủa bệnh nhân u gan. Giá trị AFP tương ứng là 2,8 ng/ml, 3,8 ng/ml, 32,1ng/ml, nồng độ AFP trong huyết thanh ở bệnh nhân u gan là > 500 ng/ml(76%), AFP < 500 ng/ml (24%). Kết luận: Hệ thống định lượng AFP sử dụng kháng thể đơn dòngkháng AFP được sản xuất từ chuột LOU có khả năng định lượng AFP tronghuyết thanh từ 0,5-350ng/ml. ABSTRACT THE SYSTEM FOR ALPHA-FETOPROTEIN QUANTITATVEDETERMINATION USING ANTI-ALPHA-FETOPROTEINMONOCLONAL ANTIBODIES OF THE B LYMPHOCYTES OF LOURAT Phan Ngoc Tien * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 11 - No 4 - 2007:208 - 212 Purpose: Set up the system for quantitative determination of alpha-fetoprotein in serum using monoclonal antibodies. Method: Experimental research. Results: The test ELISA for quantitative determination of alpha-fetoprotein in serum using monoclonal antibodies of LOU rat had realizedand characterized by the sensitivity of 0,5ng/ml. In the study for determination of alpha-fetoprotein in 90 serumsamples, composed of 35 serum samples of normal donors, 14 serumsamples of patients with HBsAg (+), 16 serum samples of patients withacute B hepatitis, 25 serum samples of patients with hepatoma, have theserum concentration of AFP 2,8 ng/ml, 3,8 ng/ml, 32,1 ng/ml, and the serumconcentration of AFP of patients with hepatoma > 500 ng/ml (76%), AFP <500 ng/ml (24%), respectively. Conclusion: The system for quantitative determination of alpha-fetoprotein in serum using monoclonal antibodies of LOU rat can quantifyfrom 0,5ng/ml to 350ng/ml. ĐẶT VẤN ĐỀ Kỹ thuật sản xuất kháng thể đơn dòng được Georges Kohler và CésarMilstein trình bày năm 1975(1), và từ đó cho đến nay kháng thể đơn dòng đãđược ứng dụng trong rất nhiều lĩnh vực nhất là trong kỹ thuật nhận diện vàđịnh lượng kháng nguyên. * Trung Tâm Đào Tạo Bồi Dưỡng Cán Bộ Y Tế TP. Hồ Chí Minh Alpha-fetoprotein (AFP), một glycoprotein, có trọng lượng phân tửkhoảng 70.000 dalton, được tổng hợp ở gan phôi thai và túi ối, vì vậy nồng độAFP bình thường trong dịch ối và huyết thanh bào thai người rất cao. Tuy nhiênAFP có trong huyết thanh người sau sinh và người trưởng thành rất thấp, chỉkhoảng 3ng/ml(7,9,11). Trong bệnh ung thư tế bào gan nguyên phát AFP tăng rất cao, và việcđịnh lượng AFP trong huyết thanh gốp phần chẩn đoán bệnh ung thư gannguyên phát. Với kháng thể đơn dòng kháng AFP, được sản xuất từ tế bào lymphô Bcủa chuột LOU đã mẫn cảm với AFP và dòng tế bào IR983(3), chúng tôi xâydựng hệ thống định lượng AFP trong huyết thanh người bằng kỹ thuậtELISA(5,10). Mục tiêu nghiên cứu Xây dựng hệ thống định lượng alpha-fetoprotein sử dụng kháng thểđơn dòng kháng alpha-fetoprotein được sản xuất từ tế bào lymphô B củachuột LOU đã mẫn cảm với AFP và dòng tế bào IR983. ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu thực nghiệm. Đối tượng và cỡ mẫu nghiên cứu - Kháng thể đơn dòng kháng AFP, kháng thể đơn dòng kháng AFP có gắnmen peroxidase. - Và 90 mẫu huyết thanh, được thu thập tại Trung Tâm Đào Tạo BồiDưỡng Cán Bộ Y Tế và Trung Tâm Ung Bướu TP Hồ Chí Minh. Trong đó25 mẫu huyết thanh của bệnh nhân có siêu âm hoặc CT scan phát hiện u gan,trong đó 20 nam và 5 nữ, 16 mẫu huyết thanh của bệnh nhân được chẩn đoánviêm gan siêu vi B cấp HBsAg (+), trong đó 9 nam và 7 nữ, 14 mẫu huyếtthanh có HBsAg (+) nhưng không có biểu hiện lâm sàng, trong đó 10 nam –4 nữ, 35 mẫu huyết thanh của người bình thường khỏe mạnh, HBsAg (-). Phương pháp thu thập số liệu - Xác định mối quan hệ tuyến tính giữa hai đại lượng nồng độ AFP và giátrị mật độ quang tương ứng (DO): dùng phương pháp ELISA. - Xác định mật độ quang tương ứng của các nồng độ AFP: 0, 5, 20, 50,75, 100, 150, 200, 300, 350, 400, 500 ng/ml. Chúng tôi sử dụng AFP tinh chế vàchuẩn độ của Viện Pasteur Tp. HCM. - Xác định nồng độ AFP thấp nhất có thể định lượng được bằng khángthể đơn dòng từ ...