Luận văn : Sử dụng kỹ thuật multiplex – PCR để phát hiện đồng thời các gen độc: stx1, stx2, eae, ehxA, và uid của E. coli part 1

1.1. Đặt vấn đề Escherichia coli (E. coli) là một trong những vi khuẩn phổ biến trong đường tiêu hóa của người và động vật máu nóng. Hầu hết các dòng E. coli tồn tại một cách tự nhiên và không gây hại trong đường tiêu hóa. Tuy nhiên, trong một số trường hợp, nhất là khi sinh lý cơ thể thay đổi, stress, loạn khuẩn xảy ra, …thì một số dòng E. coli độc có thể gây bệnh trên người và một số loài động vật. Dựa vào đặc điểm gây bệnh, người ta chia E. coli thành nhiều...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn : Sử dụng kỹ thuật multiplex – PCR để phát hiện đồng thời các gen độc: stx1, stx2, eae, ehxA, và uid của E. coli part 1 1 Phần 1. MỞ ĐẦU1.1. Đặt vấn đề Escherichia coli (E. coli) là một trong những vi khuẩn phổ biến trong đường tiêuhóa của người và động vật máu nóng. Hầu hết các dòng E. coli tồn tại một cách tựnhiên và không gây hại trong đường tiêu hóa. Tuy nhiên, trong một số trường hợp,nhất là khi sinh lý cơ thể thay đổi, stress, loạn khuẩn xảy ra, …thì một số dòng E. coliđộc có thể gây bệnh trên người và một số lo ài động vật. Dựa vào đặc điểm gây bệnh, người ta chia E. coli thành nhiều nhóm. Mỗi nhómđều có những yếu tố độc lực khác nhau và được quy định bởi những gen độc lực khácnhau. Một số gen độc lực quan trọng của E. coli như: gen ehxA, stx1, stx2 , và uid củanhóm STEC (Shiga toxigenic E. coli); gen eae của nhóm STEC và EPEC(Enteropathogenic E. coli); … Nhìn chung, E. coli có th ể được phân lập dễ dàng ở khắp n ơi trong môi trường ônhiễm phân. Ngoài ra, E. coli còn có thể phân lập được từ những vùng nư ớc ấm,không bị ô nhiễm hữu cơ; vi sinh vật này có th ể tồn tại và phát triển rất lâu trong môitrường. Với sự phân bố rộng rãi như vậy, E. coli dễ dàng vấy nhiễm vào nguyên liệuthức ăn hay nguồn nước n ếu quy trình sản xuất không đảm bảo vệ sinh nghiêm ngặt.Từ đó , có th ể gây nên các bệnh rối loạn đư ờng tiêu hóa, và nhiễm trùng đường tiếtniệu, có trường hợp gây tử vong cho người và gia súc. Do vậy, việc xác định các gen độc lực của E. coli trong phân gia súc b ìnhthường hoặc tiêu chảy là cần thiết, góp phần trong việc chẩn đoán bệnh trên động vậtvà đánh giá nguy cơ truyền lây sang người qua con đường thực phẩm. Từ đó, có nhữngbiện pháp phòng ngừa hữu hiệu nhằm bảo vệ sức khỏe cho con người và vật nuôi.Nh ững tiến bộ của công nghệ sinh học hiện nay với phương pháp PCR sẽ giúp chúngta chẩn đoán chính xác, hiệu quả trong thời gian ngắn hơn so với phương pháp truyềnthống (nuôi cấy, phân lập, …). Vì vậy, đề tài tiến h ành sử dụng kỹ thuật multiplex –PCR để phát hiện đồng thời các gen độc: stx1, stx2 , eae, ehxA, và uid của E. coli phân 2lập được từ phân bò, heo tiêu chảy và thịt bò. Hy vọng trong tương lai, đề tài sẽ đượcứng dụng vào thực tiễn chẩn đoán và tầm soát bệnh cho gia súc cũng như cho conngười qua con đ ường thực phẩm.1.2. Mục tiêu – y êu cầu1.2.1. Mục tiêu - Phát hiện gen độc lực stx1, stx2, eae, ehxA và uid của E. coli, đ ặc biệt là nhómSTEC.1.2.2. Yêu cầu - Phân lập được E. coli từ phân, thịt trên một số loại môi trường chọn lọc (MAC,SMAC, CT - SMAC). - Ứng dụng kỹ thuật multiplex – P CR p hát hiện một số gen độc lực của E. coliphân lập được. 3 Phần 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU2.1. Vi khuẩn E. coli Vi khuẩn E. coli sống bình thường trong ruột người và động vật, nhiều nhấttrong ruột già. Vi khuẩn theo phân ra môi trường b ên ngoài gây ô nhiễm cho n ước, đất,không khí, dụng cụ giết mổ, các nguyên liệu sử dụng trong chế biến thực phẩm, …2.1.1. Đặc điểm sinh học  Phân loại: vi khuẩn E. coli thuộc họ Enterobacteriaceae, giống Escherichia .  Hình thái: là trực khuẩn, gram âm, di động, không bào tử, giáp mô, có lôngtơ xung quanh.  Kích thước: khoảng 0,5 m  2 – 3 m.  Đặc tính nuôi cấy: vi khuẩn hiếu khí hoặc yếm khí tùy nghi. Có thể sinhtrưởng ở nhiệt độ 15 - 400C nhưng nhiệt độ thích hợp nhất là 370C, pH từ 6,4 – 7 ,4.Mọc tốt trên môi trư ờng thạch dinh dưỡng, sau 24 giờ h ình thành những khuẩn lạctròn, ướt, trắng đục, khoảng 2 – 3 m m.  Đặc tính sinh hóa: E. coli lên men nhiều loại đ ường, sinh hơi, khử nitratethành nitrite. Để phân biệt E. coli với vi khuẩn đường ruột khác, người ta thường sửdụng thử nghiệm IMViC. E. coli cho kết quả IMViC là: + + - - hay - + - - (FAO,1992).2.1.2. Yếu tố kháng nguyên Vi khuẩn đ ường ruột E. coli có cấu trúc kháng nguyên phức tạp. Dựa vào tínhch ất kháng nguyên, người ta phân chia các vi khuẩn cùng loại thành các tuýp huyếtthanh (serotype) khác nhau (Bộ môn vi sinh, Khoa Y, Đại học Y Dược Tp. Hồ ChíMinh, 1996):  Kháng nguyên thân O (somatic antigen) là kháng nguyên của vách tế bào,cấu tạo bởi lipopolysaccharide, có trên 150 loại khác nhau. Đặc tính của kháng nguyênO là:  Chịu được nhiệt, không bị hủy khi đun nóng 100oC trong 2 giờ.  Kháng cồn, không bị hủy khi tiếp xúc với cồn 50%. 4  Bị hủy bởi formol 5%.  Rất độc, chỉ cần 0,05 m g đủ để giết chuột nhắt sau 24 giờ. Khi kháng nguyên O gặp kháng hu ...