Nấm sợi (tt) (Filamentous Fungi)

. Phương pháp pha loãng: Phương pháp này dùng cho các mẫu đất. 1. Trước hết các mẫu đất phải được xử lý trước khi phân lập bằng cách phơi khô ở nhiệt độ phòng 2-3 ngày, sau đó dùng rây qua sàng có kích thước 2-3mm. Cân 1g đất đã xử lý cho vào 9ml nước cất khử trùng, dùng vortex hoà tan đất. 3. Pha loãng mẫu ở các nồng độ pha loãng khác nhau: 10-4, 10-5 là 2 nồng độ thích hợp để phân lập nấm trong đất ở Việt Nam. ...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nấm sợi (tt) (Filamentous Fungi) Nấm sợi (tt) (Filamentous Fungi)PHƯƠNG PHÁP PHÂN LẬP:4. Phương pháp pha loãng:Phương pháp này dùng cho cácmẫu đất.1. Trước hết các mẫu đất phải đượcxử lý trước khi phân lập bằng cáchphơi khô ở nhiệt độ phòng 2-3ngày, sau đó dùng rây qua sàng cókích thước 2-3mm.2. Cân 1g đất đã xử lý cho vào 9mlnước cất khử trùng, dùng vortexhoà tan đất.3. Pha loãng mẫu ở các nồng độpha loãng khác nhau: 10-4, 10-5 là 2nồng độ thích hợp để phân lập nấmtrong đất ở Việt Nam.4. Hút 0,5 ml dịch pha loãng ở 2nồng độ trên nhỏ lên đĩa Peptrichứa môi trường phân lập ( môitrường Martin, hoặc môi trường cơsở). Dùng que gạt trang đều dịchtrên bề mặt thạch.5. Đặt đĩa thạch trong tủ 250C,phân lập nấm sợi từ những khuẩnlạc riêng rẽ trên đĩa thạch saukhoảng thời gian 4- 10 ngày.5. Phương pháp pha loãng kếthợp với xử lý tia cực tím: Tương tự như 4 bước ban đầucủa phương pháp pha loãng. Thêmmột bước tiếp đó là đặt đĩa Peptrichứa môi trường phân lập và đãgạt dịch pha loãng đều trên bề mặtthạch vào tủ cấy và bật đèn tím 20phút.Các bước khác tương tự nhưphương pháp pha loãng thôngthường.6. Phương pháp phân lập nấmđảm và nấm túi (Basidiomycetesvà Ascomycetes) 1. Quả thể nấm sau khi thu hái,rửa sạch, cắt miếng nhỏ khoảng5cm phần bên trong. 2. Rửa sạch bằng nước cất vôtrùng (2-3 phút), sau đó dùng băngdính 2 mặt dính 3-4 miếng cắt quảthể gắn vào nắp trên của đĩa thạchnước. Đánh dấu vị trí gắn miếngnấm bằng bút viết kính ở đáy đĩathạch nước. 0 3. Ủ 20 C trong vòng 24 giờ. 4. Soi dưới kính lúp tại vị tríđánh dấu xem độ nảy mầm của bàotử nấm. 5. Dùng que cấy hình vòngtròn lấy đám bào tử vừa nảy mầmđó chuyển sang đĩa môi trườngthạch cao malt.7. Phương pháp rửa bề mặt:Phương pháp này dùng để phân lậpnấm từ lá tươi hoặc lá rụng.Cách làm: 1) Cắt mẫu lá cây (tươi vàkhô), rễ cây, cành cây,... ra thànhcác miếng nhỏ, sau đó cho vào ốngnghiệm. 2)Thêm 20ml dung dịch0.005% Aerosol OT (di-iso-octylsodium sulfosuccinate) hoặc dungdịch 0.005% Tween 80, lắc mạnhbằng máy vortex khoảng 10 phút đểloại trừ vi sinh vật bám trên bề mặtmẫu. 3) Bước làm khô mẫu: loại bỏnước trong ống nghiệm, dùng kẹpvô trùng lấy mẫu ra đặt lên bề mặtgiấy lọc để qua đêm trong tủ cấy vôtrùng, bước này có tác dụng loại bỏsự nhiễm khuẩn. 4) Dùng kẹp vô trùng đặt mẫuđã làm khô lên bề mặt môi trườngthạch LCA lăn một vòng mẫu lá(để loại tạp nhiễm (nếu có) một lầnnữa), mỗi đĩa thạch có thể chia làm8 phần để kiểm tra. 5) Sau đó chuyển mẫu sang đĩathạch môi trường LCA vô trùngkhác, mỗi đĩa nên đặt một mẫu,mỗi mẫu 5 miếng cắt. Ủ ở nhiệt độ250C trong vòng một tháng. 6) Trong khoảng thời gian đóhàng ngày phải kiểm tra sự nảymầm của các vi sinh vật dưới kínhlúp, phân lập nấm sợi nếu có.