Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu huyết thanh đặc hiệu Toxocara canis để sử dụng ngoại kiểm

Sản xuất thử nghiệm mẫu huyết thanh đặc hiệu Toxocara canis theo phương pháp đông khô và đông lạnh. Đánh giá tính đồng nhất và độ ổn định của mẫu huyết thanh sản xuất theo phương pháp đông khô và đông lạnh.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu huyết thanh đặc hiệu Toxocara canis để sử dụng ngoại kiểmY Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 5 * 2018 Nghiên cứu Y họcNGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU HUYẾT THANH ĐẶC HIỆU TOXOCARA CANIS ĐỂ SỬ DỤNG NGOẠI KIỂM Vũ Quang Huy*,**, Nguyễn Nhật Giang***TÓM TẮT Mục tiêu: Sản xuất thử nghiệm mẫu huyết thanh đặc hiệu Toxocara canis theo phương pháp đông khô vàđông lạnh. Đánh giá tính đồng nhất và độ ổn định của mẫu huyết thanh sản xuất theo phương pháp đông khô vàđông lạnh. Phương pháp: Sàng lọc mẫu huyết thanh có kháng thể kháng Toxocara canis bằng kỹ thuật ELISA; khẳngđịnh độ đặc hiệu của kháng thể kháng Toxocara canis bằng kỹ thuật Western blot. Sản xuất mẫu thử nghiệmbằng phương pháp đông khô và đông lạnh. Đánh giá đồng nhất bằng phép phân tích phương sai một yếu tố và độổn định bằng phép kiểm định t – test. Kết quả: 11 mẫu huyết thanh có kháng thể kháng Toxocara canis nồng độ cao: từ 31,517 NTU đến 56,581NTU được sàng lọc bằng ELISA. Khẳng định độ đặc hiệu kháng thể kháng Toxocara canis bằng Western blot: 01mẫu âm tính và 10 mẫu dương tính. Mẫu huyết thanh đặc hiệu Toxocara canis đưa vào sản xuất 2 lô mẫu: lômẫu đông khô nồng độ 31,012 NTU; lô mẫu đông lạnh nồng độ 27,184 NTU. Sản xuất bằng phương pháp đôngkhô và đông lạnh đều đạt độ đồng nhất có ý nghĩa thống kê Fisher. Mẫu huyết thanh sản xuất bằng phương phápđông khô đạt độ ổn định trong 1 tháng khi bảo quản ở nhiệt độ 80°C với p > 0,05. Mẫu huyết thanh sản xuấtbằng phương pháp đông lạnh đạt độ ổn định trong 3 tháng khi bảo quản ở nhiệt độ80°C với p > 0,05. Mẫu huyếtthanh sản xuất bằng phương pháp đông khô và đông lạnh đạt độ ổn định ở nhiệt độ 30°C trong thời gian 7 ngày với p> 0,05. Kết luận: Sản xuất được mẫu huyết thanh đặc hiệu Toxocara canis theo phương pháp đông khô và đônglạnh để sử dụng ngoại kiểm. Mẫu sản xuất theo phương pháp đông khô và đông lạnh đạt tính đồng nhất và độ ổnđịnh: mẫu đông khô ổn định trong 1 tháng, mẫu đông lạnh ổn định trong 3 tháng ở nhiệt độ bảo quản 80°C;mẫu ổn định trong 7 ngày ở nhiệt độ 30°C. Từ khoá: Toxocara canis, ngoại kiểm, ELISA, Western blot.ABSTRACT RESEARCH PROCESS OF PILOT PRODUCTION SERUM HAS TOXOCARA CANIS SPECIFIC ANTIBODIES USING FOR EXTERNALQUALITY ASSESSMENT Vu Quang Huy, Nguyen Nhat Giang * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 22 - No 5- 2018: 213 – 218 Objectives: To produce pilot batches of antiToxocara canis specific antibodies serum by freezedrying andfreezing methods. To evaluate homogeneity and stability of serum samples produced by freezedrying and freezingmethods. Methods: Serum samples were screened for antiToxocara canis antibodies by ELISA, then the presence ofantiToxocara canis specific antibodies was confirmed by Western blot. Samples were produced in pilotproduction by using freezedrying and freezing methods. Homogeneity and stability of final samples wereChuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học 213Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 5 * 2018evaluated by F test and ttest, respectively. Results: 11 serum samples containing high concentrations of antiToxocara canis antibodies ranging from31.517 NTU to 56.581 NTU were screened; and the specificity of antiToxocara canis antibodies was confirmedby Western blot: 01 negative sample, 10 positive samples. Two antiToxocara canis specific antibodies serumsample plots were produced: by freezedrying method with the concentration of 31.012 NTU; and by freezingmethod with concentration of 27.184 NTU. Serum samples produced by freezedrying and freezing werehomogeneity with F test. Serum samples produced by freezedrying were stable for 1 month when stored at 80°Cwith p > 0.05. Serum samples produced by freezing were stable for 3 months when stored at 80°C with p > 0.05.Samples produced by either method were stable for 7 days at 30°C with p > 0.05. Conclusions: Production of antiToxocara canis specific antibodies serum samples by freezedrying andfreezing method using for external quality assessment is feasible. Samples produced by freezedrying and freezingwere homogeneous and stable: freezedried samples were stable for 1 month, frozen samples were stable for 3months at 80°C; Samples were stable for 7 days at 30°C. Keywords: EQA, Toxocara canis, ELISA, Western blot.ĐẶT VẤN ĐỀ và đông lạnh. Phòng xét nghiệm là một hệ thống phức tạp Đánh giá tính đồng nhất và độ ổn định củaliên quan đến nhiều người và bao gồm nhiều mẫu huyết thanh sản xuất theo phương pháphoạt động để cho ra sản phẩm là kết quả xét đông khô và đông lạnh.nghiệm. Nếu kết quả xét nghiệm không chính PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUxác có thể gây ra những hậu quả nghiêm trọng. Thiết kế nghiên cứuTheo khuyến cáo của CLSI, CDC, WHO(9): để Nghiên cứu thực nghiệm.đảm bảo chất lượng kết quả xét nghiệm cần tiếnhành nội kiểm tra và ngoại kiểm tra chất lượng. Đối tượng nghiên cứu Ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm đang Mẫu huyết thanh có kháng thể khángđược triển khai rộng rãi trong các lĩnh vực xét Toxocara canis.nghiệm: hoá sinh, huyết học, vi sinh… Tuy Tiêu chuẩn chọn mẫunhiên, ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm ký Mẫu huyết thanh được lấy bằng phươngsinh trùng, đặc biệt là huyết thanh chẩn đoán ký pháp đảm bảo vô khuẩn, mẫu dương tính vớitrùng trong đó ...