Những tác động của Taxol lên việc bảo quản lạnh tế bào trứng bò trưởng thành bằng phương pháp thủy tinh hóa

Thí nghiệm được thiết kế để đánh giá hiệu quả của Taxol lên sự bảo quản lạnh tế bào trứng (TBT) bò trưởng thành MII bằng phương pháp thủy tinh hóa sử dụng cọng rạ làm vật mang. TBT ở bò thành thục (sau 22-24h nuôi) được thủy tinh hóa trong các giọt chất bảo quản lạnh có hoặc không có 1 µM Taxol (giọt 1: TCM-199, 10% FBS, 5% FCS, 10% ethylene glycol (EG), 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) trong 45 giây; giọt 2: TCM -199, 10% FBS, 5% FCS, 20% ethylene glycol (EG), 20% dimethyl sulfoxide (DMSO), 0,5 M sucrose trong 25 giây) trong các cọng rạ (0,25 ml, I.M.V, Pháp). Sau rã đông, các TBT được tiếp tục nuôi ổn định thêm 2h và tiến hành đánh giá các chỉ tiêu về tỷ lệ TBT sống trên TBT đông lạnh; tỷ lệ TBT sống trên TBT thu hồi và tỷ lệ TBT không bị tổn thương nhân. Kết quả thu được: tỷ lệ TBT sống so với TBT đem đông lạnh và TBT sống so với TBT thu hồi ở mẫu có xử lý với Taxol là cao hơn so với mẫu đối chứng (không xử lý với Taxol) (62,74 ± 2,74% so với 59,81 ± 1,75% và 70,65 ± 2,44% so với 67,66 ± 2,12%, P < 0,05), tỷ lệ TBT không bị tổn thương nhân ở cả hai mẫu xử lý và không xử lý Taxol không có sự khác biệt (78,14 ± 4,01% so với 77,89 ± 2,13%, P > 0,05). Các kết quả thu được trong thí nghiệm này cho thấy Taxol giúp tăng tỷ lệ sống của TBT bò MII sau khi đông lạnh và giải đông, nhưng chưa có tác động rõ rệt lên việc hạn chế sự tổn thương nhân của quá trình bảo quản lạnh.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Những tác động của Taxol lên việc bảo quản lạnh tế bào trứng bò trưởng thành bằng phương pháp thủy tinh hóa TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 299-305 NHỮNG TÁC ĐỘNG CỦA TAXOL LÊN VIỆC BẢO QUẢN LẠNH TẾ BÀO TRỨNG BÒ TRƯỞNG THÀNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP THỦY TINH HÓA Nguyễn Thị Thương Huyền1,2, Nguyễn Thành Trung1, Nguyễn Vũ Hoàng Linh1, Lê Thành Long3, Hoàng Nghĩa Sơn3, Phan Kim Ngọc1 (1) Đại học Khoa học tự nhiên tp. Hồ Chí Minh, (*)thuonghuyen78@yahoo.com (2) Đại học Sư Phạm tp. Hồ Chí Minh (3) Viện Sinh học nhiệt đới, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam TÓM TẮT: Thí nghiệm được thiết kế để đánh giá hiệu quả của Taxol lên sự bảo quản lạnh tế bào trứng (TBT) bò trưởng thành MII bằng phương pháp thủy tinh hóa sử dụng cọng rạ làm vật mang. TBT ở bò thành thục (sau 22-24h nuôi) được thủy tinh hóa trong các giọt chất bảo quản lạnh có hoặc không có 1 µM Taxol (giọt 1: TCM-199, 10% FBS, 5% FCS, 10% ethylene glycol (EG), 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) trong 45 giây; giọt 2: TCM -199, 10% FBS, 5% FCS, 20% ethylene glycol (EG), 20% dimethyl sulfoxide (DMSO), 0,5 M sucrose trong 25 giây) trong các cọng rạ (0,25 ml, I.M.V, Pháp). Sau rã đông, các TBT được tiếp tục nuôi ổn định thêm 2h và tiến hành đánh giá các chỉ tiêu về tỷ lệ TBT sống trên TBT đông lạnh; tỷ lệ TBT sống trên TBT thu hồi và tỷ lệ TBT không bị tổn thương nhân. Kết quả thu được: tỷ lệ TBT sống so với TBT đem đông lạnh và TBT sống so với TBT thu hồi ở mẫu có xử lý với Taxol là cao hơn so với mẫu đối chứng (không xử lý với Taxol) (62,74 ± 2,74% so với 59,81 ± 1,75% và 70,65 ± 2,44% so với 67,66 ± 2,12%, P < 0,05), tỷ lệ TBT không bị tổn thương nhân ở cả hai mẫu xử lý và không xử lý Taxol không có sự khác biệt (78,14 ± 4,01% so với 77,89 ± 2,13%, P > 0,05). Các kết quả thu được trong thí nghiệm này cho thấy Taxol giúp tăng tỷ lệ sống của TBT bò MII sau khi đông lạnh và giải đông, nhưng chưa có tác động rõ rệt lên việc hạn chế sự tổn thương nhân của quá trình bảo quản lạnh. Từ khóa: bảo quản lạnh, thủy tinh hóa, tế bào trứng bò, Taxol. MỞ ĐẦU et al. (2006) [10] kết luận rằng việc xử lý trước Phương pháp thủy tinh hóa đã thành công bằng Taxol giảm tác hại gây ra bởi quá trình và được ứng dụng trong công nghệ bảo quản tế thủy tinh hóa đến cấu trúc thoi vô sắc ở thời kì bào trứng (TBT) của động vật có vú như chuột, giảm phân, và vì thế mà cải thiện sự phát triển bò, người và ngựa. Tuy nhiên, việc bảo quản TBT lợn sau khi thủy tinh hóa. Hơn nữa, nhóm lạnh TBT hiện nay vẫn còn gặp nhiều khó khăn. nghiên cứu của Morato et al. (2008) [7] chỉ ra Sự ổn định hệ thống bộ khung tế bào trong suốt rằng việc xử lý với 1 µM Taxol trước và trong quá trình thủy tinh hóa giúp cải thiện sự sống suốt quá trình thủy tinh hóa giúp ổn định siêu sót sau giải đông và phát triển tiếp theo. Taxol cấu trúc vi ống và định vị nhiễm sắc thể ở TBT là chất làm ổn định cấu trúc vi ống. Taxol ưu bò. Trước tình hình trên, nhóm nghiên cứu tiên kết hợp với protein và có thể thay đổi nhiều chúng tôi tiến hành khảo sát những tác động của tiến trình tế bào trong cả cơ thể người và chuột. Taxol lên sự thủy tinh hóa TBT bò đã được nuôi Một trong những tiến trình này liên quan đến sự trưởng thành trong điều kiện phòng thí nghiệm tương tác với các vi ống. Taxol tương tác với (in vitro). các vi ống một cách chuyên biệt so với PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU colchicine và vinca alkaloid. Trong khi các hợp chất này làm giảm sự polyme hóa cấu trúc vi Thu nhận và nuôi chín trứng ống và đẩy mạnh sự tháo xoắn của vi ống thì Taxol làm tăng tỉ lệ polyme hóa bằng việc giảm Buồng trứng bò được thu nhận từ các lò giết bớt sự tập trung của vi ống cần cho sự polyme mổ, sau đó được bảo quản trong dung dịch nước hóa [7]. Taxol được thêm vào dung dịch thủy muối sinh lý (NaCl 0,9%) chứa 50 µg/ml tinh hóa để cải thiện sự phát triển sau giải đông Gentamycin và chuyển vể phòng thí nghiệm của TBT chưa trưởng thành ở người [5], TBT trong khoảng 3h với nhiệt độ được duy trì 33- chuột trưởng thành [8] và lợn [10]. Gần đây, Shi 37oC. Tại phòng thí nghiệm, các buồng trứng 299  Nguyen Thi Thuong Huyen et al. được rửa lại trong dung dịch PBS chứa 50 trong 15 phút ở 38,5oC , 5% CO2, độ ẩm 100% µg/ml Gentamycin đồng thời được cắt bỏ các trước khi được thủy tinh hóa trong cọng rạ. phần mỡ thừa. Các TBT sẽ được chọc hút từ ...