Thí nghiệm Hóa sinh

Thí nghiệm Hóa sinh giới thiệu tới các bạn những bài thí nghiệm trong môn Hóa sinh như một số phương pháp tủa protein; khảo sát hoạt tính invertase; xác định hoạt tính enzym alpha – amylase; xác định đạm tổng số theo phương pháp kjeldahl; một số phương pháp định tính chất đường; khảo sát lipid; định lượng vitamin C.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Thí nghiệm Hóa sinhKHOACNSINHHỌC–MÔITRƯỜNGTHÍNGHIỆMHÓASINH MỘTSỐPHƯƠNGPHÁPTỦAPROTEIN I. Phươngpháptủabằngcáctácnhângâytủalàdungmôihữucơ (Ethanol 80%,Aceton) Độhòatancủaproteintrongdungdịchphụthuộcvàonhiềuyếutố,mộttrongsốđólàhằngsốđiệnmôicủadungdịch.Nhìnchung,nhữngphântử dungmôicóhằngsốđiệnmôilớn(nhưnước,dimethylsulphoxid)cóthểổnđịnhtươngtácgiữachúngvớicácphântử proteinvàtạođiềukiệnthuậnlợichosự hòatancủaproteintrongdungdịch. Ngượclại,cácdungmôivớihằngsốđiệnmôinhỏ(aceton,ethanol…)ngăncảnsựphân táncủacácphântửproteintrongmôitrường.Dođó,độhòatancủanhữngphântửprotein giảmvàxảyrakếttủadosựlàmgiảmhằngsốđiệnmôihiệnhữucủamôitrường.Điềunàycóđượcbằngcáchthêmmộtdungmôihòatantrongnướcnhưacetonvàodungdịch chứaprotein.Sự tủabằngacetonhoặcethanol80%cónhiềuthuậnlợihơnvìnótươngđốirẻ,cósẵnởdạngtinhkhiếtvớiítchấttạpnhiễmgâyđộchayứcchếđốivớienzym, donhiệtđộ bayhơicủadungmôithấpnêndễ táchbỏ dungmôikhỏichế phẩmenzym bằngphươngphápsấynhẹbằngquạtgió. II. Phươngpháptủabằngmuối Ngườitacóthểdùngmuối(NH4)2SO4,NaCl…đểtủaproteinvìcácmuốinàyvừalàmtrunghòađiện(docáciontácđộngtươnghỗ vớicácnhómtíchđiệntráidấu),vừaloạibỏ lớpvỏ hydratcủaphântử protein.Cácproteinkhácnhaucóthể bị kếttủavới nồngđộ muốikhácnhau,vìvậycóthể dùngmuốiđể táchriêngcácproteinrakhỏihỗnhợpcủachúng.Phầnthínghiệm 1. Dụngcụvàhóachất Dụngcụ Hóachất Pipet5ml,10ml Nguyênliệuthơm(dứa) Becher50ml,100ml,250ml Etanol96% Bìnhtia Muối(NH4)2SO4 Máylytâm 2. Thựchành Cânkhoảng80gđến100gthơm,giãnátvắtlấynướcrồilytâmở6000vòng/phúttrong15phútrồiđongxemthểtíchcủanướcthơmlàbaonhiêu,ghinhậnthểtíchV.Sau 1KHOACNSINHHỌC–MÔITRƯỜNGTHÍNGHIỆMHÓASINHđóchiađôithể tíchVnướcthơmvùathuđượcthànhhaiphầnbằngnhaurồitiếnhànhtủaproteinbắnghaitácnhântủakhácnhau:Ethanol80%vàmuối(NH4)2SO4 QuytrìnhkếttủaenzymBromelinbằngcồn80% Chồingọn,vỏquả Làmsạch Nghiềnép,xaynhuyễn Lọc Bã Lytâm6000v/p,trong 15phút Bã cồn80%,làm Dịchtrong lạnh40C Tủacồn4oC/2giờ Lytâm6000v/p,trong 20phút Bỏ Thutủa dịch trong Sấykhô 2KHOACNSINHHỌC–MÔITRƯỜNGTHÍNGHIỆMHÓASINH BromelinLưuý:Phốitrộncồnvớidịchdứatheotỉlệ4:1(1dứa:4cồn) QuytrìnhthunhậnenzymBromelinbằngmuối(NH4)2SO4 Chồingọn,vỏ quả Làmsạch Nghiềnép,xaynhuyễn Lọc Bã Lytâm6000v/p,15– 20phút Bã Ammonium Dịchtrong sulfate70% bãohòa 3KHOACNSINHHỌC–MÔITRƯỜNGTHÍNGHIỆMHÓASINH Hỗnhợpdịchdứa,để ởnhiệtđộphòng30 ph ...