Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng tạp Ethyl-(E/Z)-3-(2-carbethoxy-2-cyanoethenyl)amino-1H-pyrazol-4-carboxylat có khả năng gây đột biến gen của allopurinol bằng phương pháp LC-MS/MS

Bài viết trình bày xây dựng và thẩm định quy trình định lượng Ethyl-(E/Z)-3-(2- carbethoxy-2-cyanoethenyl)amino-1H-pyrazol-4-carboxylat của allopurinol theo hướng dẫn ICH M7(R1) về tạp có khả năng gây đột biến gen bằng phương pháp LC-MS/MS.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng tạp Ethyl-(E/Z)-3-(2-carbethoxy-2-cyanoethenyl)amino-1H-pyrazol-4-carboxylat có khả năng gây đột biến gen của allopurinol bằng phương pháp LC-MS/MS TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC CẦN THƠ – SỐ 69/2023 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG TẠP ETHYL-(E/Z)-3-(2-CARBETHOXY-2-CYANOETHENYL)AMINO-1H-PYRAZOL-4-CARBOXYLAT CÓ KHẢ NĂNG GÂY ĐỘT BIẾN GEN CỦA ALLOPURINOL BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS Lữ Thiện Phúc1*, Trần Hà Thái Châu1, Nguyễn Uy Khang1, Tạ Trung Tín1, Kim Thị Thu Trinh1, Trần Việt Hùng2,Trương Ngọc Tuyền3 1. Trường Đại học Y Dược Cần Thơ 2. Viện Kiểm nghiệm thuốc Thành phố Hồ Chí Minh 3. Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh *Email: ltphuc@ctump.edu.vn Ngày nhận bài: 13/5/2023 Ngày phản biện: 09/12/2023 Ngày duyệt đăng: 25/12/2023TÓM TẮT Đặt vấn đề: Hướng dẫn ICH M7(R1) về giới hạn tạp chất có khả năng gây độc tính hoặcđột biến gen bắt buộc kiểm tra nghiêm ngặt so với Dược điển vì ảnh hưởng hiệu quả điều trị lâmsàng và tính an toàn của thuốc với bệnh nhân. Do đó kiểm tra chất lượng nguyên liệu cũng nhưthành phẩm thuốc, đặc biệt thuốc nằm trong danh mục thuốc thiết yếu hiện hành lần VII của ViệtNam như allopurinol và tạp F liên quan bằng kỹ thuật có độ nhạy cao LC-MS/MS là xu hướng vàcấp thiết. Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng Ethyl-(E/Z)-3-(2-carbethoxy-2-cyanoethenyl)amino-1H-pyrazol-4-carboxylat của allopurinol theo hướng dẫn ICHM7(R1) về tạp có khả năng gây đột biến gen bằng phương pháp LC-MS/MS. Đối tượng và phươngpháp nghiên cứu: Tạp Ethyl-(E/Z)-3-(2-carbethoxy-2-cyanoethyl)amino-1H- pyrazol-4-carboxylat(tạp F theo USP standard 2023) của allopurinol, xây dựng và thẩm định quy trình định lượng bằngLC-MS/MS theo hướng dẫn ICH Q2(R2); ICH M7(R1) và EC-657/2002. Kết quả: Điều kiện sắc ký:cột sắc ký Phenomenex Gemini NX C18 (150 mm x 4,6 x 5 µm) ở nhiệt độ 25˚C, pha động gồmacetonitril - nước acid formic 0,05% (85:15) theo chương trình isocratic, thể tích tiêm mẫu 10 µL,tốc độ dòng 0,8 mL/phút. Chất phân tích phát hiện bằng detector MS/MS; ion phân tử ban đầu→ionđịnh lượng có m/z: 279,10→233,00. Thẩm định quy trình theo hướng dẫn ICH và EC-657/2002:quy trình đạt độ đặc hiệu – chọn lọc; đường chuẩn tuyến tính trong khoảng nồng độ 3 - 100 ppb vàhệ số tương quan là 0,997; giới hạn phát hiện thấp từ 1 - 3 ppb; giới hạn định lượng 3 ppb; độđúng đạt tỷ lệ hồi phục từ 99,30 - 101,37% , độ chính xác đạt yêu cầu RSD < 2%. Kết luận: Đã xâydựng và thẩm định quy trình định lượng tạp Ethyl-(E/Z)-3-(2-carbethoxy-2-cyanoethenyl)amino-1H-pyrazol-4-carboxylat của allopurinol bằng phương pháp LC-MS/MS. Từ khóa: Ethyl-(E/Z)-3-(2-carbethoxy-2- cyanoethyl)amino-1H- pyrazol-4-carboxylat,ICH M7(R1), tạp gây đột biến gen. 164 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC CẦN THƠ – SỐ 69/2023ABSTRACT DEVELOPMENT AND VALIDATION OF LC-MS/MS FOR ANALYZING POTENTIAL GENOTOXIC IMPURITY ETHYL-(E/Z)-3-(2- CARBETHOXY-2-CYANOETHENYL) AMINO-1H-PYRAZOL-4- CARBOXYLAT IN ALLOPURINOL Lu Thien Phuc1*, Tran Ha Thai Chau1, Nguyen Uy Khang1, Ta Trung Tin1, Kim Thi Thu Trinh1, Tran Viet Hung2, Truong Ngoc Tuyen3 1. Can Tho University of Medicine and Pharmacy 2. Institute of Drug Quality Control Ho Chi Minh City 3. University of Medicine and Pharmacy at Ho Chi Minh City Background: ICH M7(R1) Guideline on the limits of potentially toxic or mutagenicimpurities requires rigorous testing against Pharmacopoeia because of their impact on clinicalefficacy and patient safety. Therefore, check the quality of raw materials as well as finished drugproducts, especially drugs on the 7th current list of essential drugs of Vietnam such as allopurinoland related impurities F by highly sensitive technique LC-MS/MS trend and urgency. Objectives:To develop and validate a process for quantification of impurity ethyl-(E/Z)-3-(2-carbethoxy-2-cyanoethenyl) amino-1H-pyrazol-4-carboxylat (F impurity according to USP standard 2023) ofallopurinol according to the guidelines of ICH M7 (R1) in genotoxic impurities by high-performanceliquid chromatography twice mass spectrometry. Materials and methods: Related to impurity F ofallopurinol, develop, and validate the quantitative procedure by LC-MS/MS according to ICHQ2(R2); ICH M7(R1) and EC-657/2002 guidelines. Results: Chromatographic conditions:Phenomenex Gemini NX C18 (150 mm x 4.6 x 5 µm) kept at 25°C, mobile phase acetonitrile - formicacid water 0.05% (85:15) according to isocratic program, sample injection volume 10 µL, flow rate0,8 mL/min. The analyte is detected by an MS/MS detector, mass spectrometry fractions→quantitative fragmentation 279.10→233.00. Process validation according to ICH and EC-657/2002guidelines: procedure achieves specificity – selectivity; the calibration curves were linear over therange of 3 - 100 ppb and the correlation coefficient is 0,997; low detection limit from 1 to 3 ppb;quantitative limit: 3 ppb; accuracy achieved recovery rate from 99.30 – 101.37%, precision meetsthe requirements RSD < 2%. Conclusion: The process of quantification of Ethyl-(E/Z)-3-(2-carbethoxy-2-cyanoethenyl) amino-1H-pyrazol-4-carboxylat impurities of allopurinol has beendeveloped and validated by LC-MS/MS method. Keywords: Ethyl-(E/Z)- 3-(2-carbethoxy-2-cyanoethyl) amino-1H- ...