Bài giảng Vai trò và ý nghĩa của các xét nghiệm sinh học phân tử trong chẩn đoán và theo dõi điều trị bệnh viêm gan siêu vi B và C - BS.TS. Phạm Hùng Vân

Bài giảng Vai trò và ý nghĩa của các xét nghiệm sinh học phân tử trong chẩn đoán và theo dõi điều trị bệnh viêm gan siêu vi B và C bao gồm những nội dung về nhiễm viêm gan siêu vi B; xét nghiệm sinh học phân tử cho viêm gan B, c; nguyên tắc PCR; các bước trong xét nghiệm PCR phát hiện tác nhân vi sinh vật;... Mời các bạn tham khảo.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài giảng Vai trò và ý nghĩa của các xét nghiệm sinh học phân tử trong chẩn đoán và theo dõi điều trị bệnh viêm gan siêu vi B và C - BS.TS. Phạm Hùng Vân Vai trò và ý nghĩa của các  xét nghiệm sinh học phân tử  trong chẩn đoán và theo dõi điều trị bệnh  viêm gan siêu vi B và C  BS. TS. Phạm Hùng Vân(1) (1) Giảng viên Bộ Môn Vi Sinh, Khoa Y, ĐHYD TP. HCM Chủ nhiệm tổ Bộ Môn Vi Sinh, Khoa ĐDKTYH Phó phòng thí nghiệm trung tâm ĐHYD Thành viên chính của ANSORP và ARFID Cố vấn khoa học Công Ty NAM KHOA Nhiễm viêm gan siêu vi B (HBV) WHO 2001 Xét nghiệm sinh học phân tử cho viêm gan B HBsAg [+] HBVDNA [+] PCR phát hiện HBV-DNA Phát hiện đột biến precore qHBVDNA qPCR định lượng HBV-DNA 105 ALT ALT ALT Normal Điều trị Biopsie or Fibroscan qPCR định lượng AFP qHBVDNA/3th HBV-DNA 105 LamR, AdfR Bất thường Phát hiện đột biến kháng thuốc Nhiễm viêm gan siêu vi C (HCV) Schering­Plough Diễn tiến nhiễm HCV Nhiễm HCV (100) (Phase cấp) 85% (85) Mạn tính 15% (15) Khỏi 20% (17) Xơ gan 80% (68) Ổn định 25% (4.5) 75% (13) Ung thư gan Diễn tiến chậm Xơ gan tiến triển Xét nghiệm sinh học phân tử cho viêm gan C Định lượng RT­qPCR định lượng HCV­RNA HCV genotype Định genotype HCV Tuần 12 RT­qPCR định lượng HCV­RNA Định lượng >2 log10 hay âm tính Thực tế đã đòi hỏi các nhà khoa học, đặc biệt là các nhà y học phải nhanh chóng phát triển và ứng dụng các kỹ thuật sinh học phân tử hiện đại, nhất là PCR và real-time PCR vào chẩn đoán và hổ trợ cho theo dõi điều trị bệnh nhân viêm gan siêu vi tại Việt Nam PCR và real-time PCR là một kỹ thuật hoàn toàn mở do vậy chúng ta có khả năng không phải bị lệ thuộc vào các hãng sản xuất kit ở nước ngoài, nhờ vậy giá thành sẽ rẽ Nguyên tắc PCR DNA đích 4 1 Biến tính (94oC ) 1 2 2 Bắt cặp (55-65o C) 3 5’ 3’ 3’ 5’ 3 Kéo dài (72o C) n 2n Mồi Taq polymerase dNTP PCR buffer + MgCl2 DNA đích (Template) PCR MIX 30X-40X 94oC/15s-1min 55-65oC/15s- 1min 72oC/30s-3min Phát hiện  qua kích thước (điện di)  hay qua trình tự (lai) Real­time PCR chạy PCR và đồng thời phát hiện sản phẩm khuếch đại  Ct curve Standard  curve Melt curve Camera Laser or UV Thiết bị Real-time PCR Primers Taq polymerase dNTP PCR buffer + MgCl2 Chất phát huỳnh quang Target DNA (Template) Real-time PCR MIX Real-time PCR mix PCR có đặc hiệu không? Nuôi cấy PCR PCR đặc hiệu tương đương nuôi cấy Định danh dựa vào kiểu hình sinh vật hóa học  Xác định dựa vào kích thước đoạn gen  biểu hiện từ các kiểu gen hay một trình tự đặc hiệu của đoạn gen Các bước trong xét nghiệm PCR phát hiện tác nhân vi sinh vật Mẫu thử Chuẩn bị mẫu thử Tách chiết nucleic acid Chạy PCR Phát hiện sản phẩm PCR và phân tích kết quả Một xét nghiệm PCR định tính chuẩn mực Một xét nghiệm qPCR định lượng chuẩn mực Một xét nghiệm qPCR định lượng chuẩn mực ...