Giới thiệu một số phương pháp tách ADN từ máu toàn phần - Tạp chí nghiên cứu y học

Tách chiết ADN là khâu cơ bản và rất quan trọng trong kỹ thuật sinh học phần tử. Chúng tôi đã tiến hành kỹ thuật tách chiết ADN từ máu ngoại vi: kỹ thuật perchlorate sodium, kỹ thuật Acetate amonium. kỹ thuật QIA ampkit. Đồng thời so sánh các kỹ thuật đó với nhau dựa trên một số tiêu chuẩn.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Giới thiệu một số phương pháp tách ADN từ máu toàn phần - Tạp chí nghiên cứu y học TCNCYH 23 (3) 2003 Giíi thiÖu mét sè ph−¬ng ph¸p t¸ch ADN tõ m¸u toµn phÇn Lª Hoµn, TrÇn Kh¸nh Chi, Ph¹m ThÞ NguyÖt H»ng, B¹ch Kh¸nh Hßa §¹i häc Y Hµ Néi T¸ch chiÕt ADN lµ kh©u c¬ b¶n vµ rÊt quan träng trong kü thuËt sinh häc ph©n tö. Chóng t«i ®·tiÕn hµnh mét sè kü thuËt t¸ch chiÕt ADN tõ m¸u ngo¹i vi: kü thuËt Perchlorate sodium, kü thuËtAcetate amonium, kü thuËt QIA ampkit. §ång thêi so s¸nh c¸c kü thuËt ®ã víi nhau dùa trªn métsè tiªu chuÈn. KÕt qu¶ cho thÊy kü thuËt Perchlorate sodium cã nhiÒu −u ®iÓm nhÊt. Kü thuËt nµy®ang ®−îc sö dông th−êng qui t¹i Labo Trung t©m Y sinh häc, §¹i häc Y Hµ Néi.I. §Æt vÊn ®Ò phÝ thùc hiÖn vµ møc ®é ®éc h¹i ®èi víi ng−êi thùc hiÖn. ADN (Acid Deoxyribose Nucleic) lµ mét II. §èi t−îng vµ ph−¬ng ph¸p®¹i ph©n tö ®−îc cÊu thµnh tõ c¸c ®¬n ph©n lµnucleotid. Trong c¬ thÓ, tÊt c¶ c¸c tÕ bµo cã nghiªn cøunh©n ®Òu chøa ph©n tö ADN. Ph©n tö nµy mang 1. §èi t−îngtoµn bé th«ng tin di truyÒn cña c¸ thÓ. Nguån M¸u ngo¹i vi chèng ®«ng b»ng EDTA.th«ng tin di truyÒn ®ã ®−îc æn ®Þnh nhê ho¹t®éng tù sao chÐp cña ADN theo nguyªn t¾c 2. Ph−¬ng ph¸p nghiªn cøu“b¸n b¶o tån. §ång thêi th«ng qua ho¹t ®éng Thùc hiÖn mét sè kü thuËt t¸ch ADN kh¸ccña c¸c bé m¸y tÕ bµo, nguån th«ng tin nµy nhau víi nguyªn lý c¬n b¶n gåm 4 b−íc:®−îc chuyÓn sang c¸c ph©n tö ARN th«ng tinra ngoµi bµo t−¬ng tæng hîp nªn ph©n tö • Ph¸ vì hång cÇuprotein: • Ph¸ vì b¹ch cÇuADN sao m· mARN dÞch m· Protein • Lo¹i bá protein Trªn c¬ së ®ã, sinh häc ph©n tö ®· ph¸t triÓn • Tña ADNc¸c kü thuËt di truyÒn trªn ADN vµo nghiªncøu vµ chÈn ®o¸n mét sè bÖnh. §Ó thùc hiÖn kü 2.1. Kü thuËt t¸ch ADN b»ng PerchloratethuËt nµy ®ßi hái ph¶i cã nguån nguyªn liÖu sodiumADN ®¶m b¶o c¶ vÒ chÊt vµ l−îng. V× vËy, t¸ch (Kü thuËt cña S.A. Miller, D.D. Dykes, H.F.chiÕt ADN lµ kh©u ®Çu tiªn, c¬ b¶n vµ rÊt quan Polesky - 1988)träng trong c¸c qui tr×nh thao t¸c trªn ADN.Víi tÇm quan träng ®ã, ®Ò tµi nµy tiÕn hµnh • Ho¸ chÊt:øng dông mét sè kü thuËt t¸ch ADN kh¸c nhau - Dung dÞch I (cho 1 lÝt):vµ so s¸nh chóng víi nhau. Sucrose 0,3M 102g Môc ®Ých cña ®Ò tµi lµ t×m ra mét kü thuËtphï hîp nhÊt víi c¸c tiªu chuÈn vÒ: chÊt l−îng Tris HCl 1M pH7.5 10mM 10mlADN, hµm l−îng ADN, thêi gian tiÕn hµnh, chi2TCNCYH 23 (3) 2003 MgCl2 5mM 1g ➢ Tña ADN: Triton 100 1% 10ml - LÊy n−íc næi sang mét tube kh¸c. - Dung dÞch II (cho 500ml): - Thªm vµo 2,5 thÓ tÝch cån tuyÖt ®èi, l¾c nhÑ, ñ ë -300C qua ®ªm thu ®−îc tña ADN NaCl 0,0075M 2,19g d¹ng h×nh søa. EDTA 0,024M 4,46g - Röa tña b»ng cån 70%, ®Ó kh«, hoµ tña - SDS (Sodium Dodecyle Sunfate) 10% b»ng T.E. - Perchlorate sodium 5M 2.2. Kü thuËt t¸ch ADN b»ng acetate dammonium - NaCl 6M (Kü thuËt cña S.A.Miller, D.D.Dykes, - Cån tuyÖt ®èi H.F.Polesky - 1988) - Cån 70% • Ho¸ chÊt - T.E (cho 1lÝt) gåm: T.E 20-5: TrisHCl 20mM Tris HCl 1M pH8 10ml EDTA 5mM EDTA 0,5M pH8 2ml - Sarkosyl 20% • Qui tr×nh t¸ch: - Proteinase K 10mg/ ml ➢ Ph¸ vì hång cÇu: - Acetate dammonium - LÊy 10ml m¸u chèng ®«ng b»ng EDTA. - Cån tuyÖt ®èi - Thªm vµo ®ã dung dÞch I cho ®ñ 50ml. - Cån 70% 0 - Trén ®Òu, ly t©m 4200 vßng/ 10 phót/ 4 C. • Qui tr×nh t¸ch - Lo¹i bá n−íc næi, thu ®−îc cÆn tr¾ng (nÕu ➢ Ph¸ vì hång cÇu:cßn hång cÇu th× tiÕp tôc lo¹i bá hång cÇu b»ngdung dÞch I). - LÊy m¸u chèng ®«ng b»ng EDTA. ➢ Ph¸ vì b¹ch cÇu: - Trén ®Òu, ly t©m nhÑ 2000 vßng/ 15 phót. - Sau khi thu ®−îc cÆn tr¾ng cho thªm vµo: - LÊy phÇn huyÕt t−¬ng giµu b¹ch cÇu, ®Æt trong ®¸ 30 phót. 4,5ml dung dÞch II - Thªm vµo 15ml dung dÞch T.E 20-5, trén 125µl SDS 10% ®Òu, ly t©m 1500 vßng/ 10 phót. 1,1ml perchlorate sodium 5M - Lo¹i bá n−íc næi, thu cÆn tr¾ng. 10µl ...