Tổng hợp và chuyển cấu trúc microrna nhân tạo vào cây đậu nành (Glycine max L.)

Mục tiêu của nghiên cứu là tổng hợp microRNA nhân tạo có khả năng bất hoạt gene Minc14137. Cấu trúc microRNA này được chèn vào vector biểu hiện và chuyển vào cây đậu nành bằng vi khuẩn A. tumefaciens nhằm tìm hiểu chức năng của effector MINC14137 trong tiến trình ký sinh thực vật của tuyến trùng sưng rễ thông qua con đường làm câm lặng gene bởi cây chủ (HIGS). Mời các bạn cùng tham khảo!
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tổng hợp và chuyển cấu trúc microrna nhân tạo vào cây đậu nành (Glycine max L.)Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần thứ 21 năm 2019 Kỷ yếu khoa họcTỔNG HỢP VÀ CHUYỂN CẤU TRÚC microRNA NHÂN TẠO VÀO CÂY ĐẬU NÀNH (Glycine max L.) Hà Thị Trúc Mai, Đặng Lê Trâm, Nguyễn Thế Phương, Nguyễn Thị Ngọc Loan, Nguyễn Vũ Phong* Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh *Tác giả liên hệ: nvphong@hcmuaf.edu.vn TÓM TẮTEffector là các protein cụ thể được tuyến trùng tiết vào trong tế bào thực vật, tạo thuận lợi choquá trình ký sinh cây chủ. Bất hoạt các effector này làm giảm khả năng ký sinh của tuyến trùngvà giúp hạn chế tác hại do tuyến trùng gây ra. Gene Minc14137 mã hóa cho một effector chưarõ chức năng được tạo dòng từ tuyến trùng Meloidogyne incognita. Mục tiêu của nghiên cứulà tổng hợp microRNA nhân tạo có khả năng bất hoạt gene Minc14137. Cấu trúc microRNAnày được chèn vào vector biểu hiện và chuyển vào cây đậu nành bằng vi k��� A. tumefaciensnhằm tìm hiểu chức năng của effector MINC14137 trong tiến trình ký sinh thực vật của tuyếntrùng sưng rễ thông qua con đường làm câm lặng gene bởi cây chủ (HIGS).Từ khóa: Agrobacterium tumefaciens, htpII, nốt lá mầm, microRNA, PCR overlapping. CONSTRUCTION AND TRANSFORMATION AN ARTIFICIAL microRNA STRUCTURE TO SOYBEAN (Glycine max L.) Ha Thi Truc Mai, Dang Le Tram, Nguyen The Phuong, Nguyen Thi Ngoc Loan, Nguyen Vu Phong* Nong Lam University Ho Chi Minh City *Corresponding Author: nvphong@hcmuaf.edu.vn ABSTRACTEffectors are specific proteins secreted by nematodes into plant cells that facilitate theirparasitism to host plants. Inactivation of these effectors reducing the parasitic ability ofnematodes on plants to help reduce the damage caused by nematodes. Gene Minc14137encodes an effector unknown function that is cloned from the Meloidogyne incognita. Theobjective of the study was to synthesize artificial microRNAs capable of inactivating geneMinc14137. This microRNA structure was inserted into an expression vector in soybean by A.tumefaciens to investigate the function of effector MINC14137 in the parasitic process of root-knot nematode via gene silencing by host plant (HIGS).Keywords: Agrobacterium tumefaciens, htpII, cotyledonary node, microRNA, PCRoverlapping.TỔNG QUAN chế được nhiều tổn thất do tuyến trùng gây ra.Đậu nành (Glycine max (L.)) là một trong Trong nghiên cứu này, gene Minc14137 mãnhững cây trồng mang lại giá trị kinh tế cao. hóa cho một effector chưa rõ chức năng, tạoNhững năm gần đây, sản lượng đậu nành ngày dòng từ tuyến trùng M. incognita, được sửcàng giảm mạnh do tuyến trùng gây hại. Việc sử dụng làm dữ liệu để tổng hợp microRNA nhândụng hóa chất kiểm soát tuyến trùng mặc dù có tạo có khả năng bất hoạt gene này. Cấu trúchiệu quả nhưng lại ảnh hưởng lớn đến môi microRNA sau đó được chèn vào vector biểutrường và sức khỏe con người. Vì vậy, bên cạnh hiện và chuyển vào cây đậu nành DT22 bằngcác phương pháp sinh học truyền thống, việc tìm vi khuẩn A. tumefaciens.kiếm một phương pháp mới, thân thiện với môitrường đang được quan tâm nghiên cứu VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN(Nguyễn Vũ Phong, 2018). Tuyến trùng tiết ra CỨUcác effector tạo thuận lợi cho quá trình ký sinh Thiết kế và tổng hợp miRNA nhân tạocây chủ. Bất hoạt các effector này làm giảm Trình tự gene Minc14137 của dòng tuyếnkhả năng ký sinh của tuyến trùng, từ đó hạn trùng Mi-PN03, độ tương đồng đến 95% với 90Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần thứ 21 năm 2019 Kỷ yếu khoa họccDNA của tuyến trùng M. incognita trên (đồng nuôi cấy mẫu và vi khuẩn trong 4 hoặcGenBank (ID: AW441106.1), được sử dụng 6 ngày) ở 25oC, trong điều kiện ánh sáng mờ.để thiết kế các miRNA nhân tạo nhờ phần Để loại bỏ vi khuẩn trên mẫu đã lây nhiễm,mềm WMD3 (Cấu trúc amiRNA mục tiêu rửa mẫu bằng 50 ml môi trường tạo chồi có bổđược chọn dựa theo các tiêu chí đề xuất bởi sung kháng sinh cefotaxime 100 mg/l,Schwab và ctv 2006). Công cụ Oligo của phần vancomycin 50 mg/l, timentin 50 mg/l. ThờimềmWMD3 được sử dụng để thiết kế các gian rửa mẫu 2 - 3 phút. Mẫu sau rửa được cấyprimer thay thế đoạn 21 nu của precursor ath- nghiêng một góc 45o trên môi trường thanh lọcmi319a bởi đoạn miRNA 21 nu mới nhờ kỹ có chứa cefotaxime 100 mg/l, timentin 50thuật PCR overlapping. Cấu trúc amiRNA sau ...