Ứng dụng enzyme và siêu âm phá vách bào tử nấm Linh Chi (Ganoderma lucidum)

Mục đích của nghiên cứu này là xác định phương pháp phá vách bào tử nấm Linh Chi Ganoderma lucidum. Enzyme chitinase trong dịch nuôi cấy Trichoderma harzianum T2 và chế phẩm thương mại C20032 hoạt động tối ưu ở 500C và pH 5. Tỉ lệ phá v vách bào tử bào tử nấm Linh Chi Ganoderma lucidum khi kết hợp enzyme dịch nuôi cấy nấm Trichoderma harzianum T2 và chế phẩm thương mại cellulase C20032 ở 500C, pH 5 trong 10 ngày là 53,5%. Mời các bạn cùng tham khảo!
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Ứng dụng enzyme và siêu âm phá vách bào tử nấm Linh Chi (Ganoderma lucidum) Hội nghị Khoa học An toàn dinh dưỡng và An ninh lương thực lần 2 năm 2018ỨNG DỤNG ENZYME VÀ SIÊU ÂM PHÁ VÁCH BÀO TỬ NẤM LINH CHI (GANODERMA LUCIDUM) *Đặng Thị Kim Tuyền; Trần Điền Ánh Tuyết Trường Đại học Công nghệ TP.HCM Email: *dtkimtuyen96@gmail.comTÓM TẮTMục đích của nghiên cứu này là xác định phương pháp phá vách bào tử nấm Linh ChiGanoderma lucidum. Enzyme chitinase trong dịch nuôi cấy Trichoderma harzianum T2 và chếphẩm thương mại C20032 hoạt động tối ưu ở 500C và pH 5. Tỉ lệ phá v�vách bào tử bào tử nấmLinh Chi Ganoderma lucidum khi kết hợp enzyme dịch nuôi cấy nấm Trichoderma harzianum T2và chế phẩm thương mại cellulase C20032 ở 500C, pH 5 trong 10 ngày là 53,5%. Sau khi xử lýenzyme, áp dụng chế độ siêu âm công suất 500 W trong 5 phút ở độ khuếch đại 100%, tỉ lệ pháv�bào tử tăng lên đến 71,7%. Tiền xử lý bào tử trước khi thực hiện phản ứng enzyme là bướckhông thể thiếu, tuy nhiên không có sự khác biệt về tỉ lệ phá v�vách bào tử giữa 4 điều kiệnnhiệt độ là -40C, -200C, -700C (đá khô) và -1960C (nitơ lỏng). Sau khi phá v�bào tử bằngenzyme, dịch trong sau ly tâm chứa 12,03% polysaccharide và 50,5% lipid tổng, trong khi đó từphần vỏ bào tử chỉ thu được 0,04% polysaccharide và 1,08% lipid tổng. Sau khi phá v�bào tửbằng enzyme kết hợp siêu âm, dịch trong sau ly tâm chứa 16,80% polysaccharide và 86,17% lipidtổng, trong khi đó từ phần vỏ bào tử chỉ thu được 0,03% polysaccharide và 6,75% lipid tổng. Từđó, quy trình phá v�bào tử nấm Linh chi bằng enzyme kết hợp siêu âm và thu hồi hoạt chất từbào tử phá v�được đề nghị.Từ khóa: chitinase, phá vách bào tử Ganoderma lucidum, polysaccharide, lipid, siêu âm.GIỚI THIỆUBào tử Linh Chi (Ganoderma lucidum spores) có kích thước rất nhỏ (khoảng 5-6 × 8,5 – 12 μm),chứa các thành phần có hoạt tính sinh học như polysacharide, triterpenoid, acid béo, amino acid,vitamin và các nguyên tố vi lượng với hàm lượng đậm đặc hơn thể quả nấm Linh Chi từ 7 – 20lần (Cheng CR et al., 2010, Heim et al., 1992, Boh B et al., 2007). Các hoạt chất này có giá trịdinh dư�ng và dược lý có thể tăng cường sức khỏe, giúp ngăn ngừa ung thư và tái phát. Tuynhiên, bào tử Linh Chi có lớp vách đôi rất cứng, dày c�0,7 - 1,2 μm, enzyme tiêu hóa của cơ thểngười không thể phá v�. Chỉ khi nào vách ngoài của nó bị phá v�thì các hợp chất có hoạt tínhsinh học đó mới phát huy tác dụng quý giá trong trị liệu. Thành phần vách bào tử nấm Linh Chichứa 19,01% Si, 19,01% Ca, 52,08% - 57,64% là chitin (Jingjing Ma et al., 2007). Cấu trúc phứctạp của vách bào tử nấm Linh Chi nhờ sự liên kết của cellulose với các thành phần trên tạo ravách bền vững giúp cho bào tử nấm Linh Chi chống chịu được acid và kiềm. Việc phân hủy 391Hội nghị Khoa học An toàn dinh dưỡng và An ninh lương thực lần 2 năm 2018chitin đóng vai trò rất quan trọng trong việc phá vách bào tử nấm Linh chi. Nhiều nghiên cứu pháv�vách bào tử sử dụng phương pháp nghiền. Một số khác sử dụng enzyme để giảm thiểu ảnhhưởng của nhiệt độ lên hoạt tính sinh học hoạt chất trong bào tử (Patent CN 101596220 A, 2009).Các thông số kỹ thuật của các quá trình này đều không được công bố rõ ràng. Đó là lý do nghiêncứu này được tiến hành nhằm xác định các thông số phá v�bào tử nấm Linh Chi bằng enzyme vàkết hợp siêu âm, từ đó có thể trích ly các hoạt chất đưa vào ứng dụng.NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁPNguyên liệuBào tử nấm Linh Chi được thu thập từ các trại nấm trên địa bàn Tp. Hồ Chí Minh, sấy ở nhiệt độ400C, bảo quản trong điều kiện khô ráo.Trichoderma harzianum T2 được phân lập từ thể quả nấm Linh Chi do phòng thí nghiệm ViệnKhoa học Ứng dụng trường Đại học Công nghệ TP.HCM cung cấp.Enzyme thương mại C20032 được cung cấp bởi công ty TNHH Khoa học và Công nghệ Sài Gòn.Phương pháp nghiên cứuNuôi cấy Trichoderma harzianum T2Môi trường chứa glucose 1 g/L, chitin huyền phù 10 g/L, NH4NO3 0,5 g/L, MgSO4.7H2O 0,5 g/L,K2HPO4 0,7 g/L, KH2PO4 0,3 g/L, FeSO4.7H2O 0,01 g/L, ZnSO4 0,001 g/L, chloramphenicol0,005 g/L, hấp tiệt trùng ở 1210C, 1 atm, 15 phút. Cấy bào tử Trichoderma harzianum T2 đã nuôicấy 7 ngày trên môi trường PDA với mật độ 106 bào tử/ml, lắc 150 vòng/phút ở nhiệt độ phòng.Sau 3 ngày nuôi cấy, thu dịch trong sau khi ly tâm 4000 vòng/phút trong 10 phút.Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ và pH lên hoạt động enzyme chitinase trong dịch nuôi cấyTrichoderma harzianum T2 (DNC) và chế phẩm C20032 (EC)Hoạt động của enzyme chitinase trong dịch nuôi cấy được xác định với cơ chất là chitin 1%, nhiệtđộ 300C, 400C, 500C, 600C, 700C, pH 4, 5, 6, 7. Thời gian phản ứng là 60 phút, bất hoạt enzymebằng cách đun sôi ...